毒死蜱降解细菌的筛选、降解特性及其固定化研究-农药学专业论文.docx

中 文 摘 要 有机磷农药以其高效、廉价等特点而被广泛应用，但其对人体健康和环境等影响较 大是不容忽视的问题。目前国内外已报道的甲基对硫磷降解菌有假单胞菌（Pseudomonas sp.）、黄杆菌（Flavobacterium sp.）、产碱菌（Alcaligenes sp.）和节杆菌（Arthrobacter sp.） 等；毒死蜱降解菌有阿氏肠杆菌（Enterobacter asburiae）、鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas sp.）和玫瑰红红球菌（Rhodocouus rhodochrous）等。但是已报道的细菌由于环境适应 性不强等原因，还未达到开发利用的要求，因此仍需筛选更加高效的专性或兼性降解菌。 另外，有关同一菌种的不同菌株对有机磷农药的降解差异性也鲜有报道。本研究旨在寻 找高效降解有机磷农药的菌株，明确菌株的分类学地位，同时探讨环境条件对菌株降解 有机磷农药的影响、单株菌的降解动力学和降解混合菌的构建。进一步提取降解酶，优 化产酶条件，明确降解酶的酶促降解特性，进而研究优势菌株的固定化条件和特性。研 究结果如下： 1. 采用直接分离与富集驯化培养相结合的方法，分离筛选出三株能够降解有机磷农 药的菌株HY-1、HY-2和HY-4，在形态特征和生理生化分析的基础上，又对其16S rDNA 序列进行了分析，并研究了其对甲基对硫磷（Methyl-parathion）、毒死蜱（Chlorpyrifos） 和三唑磷（Triazophos）的降解特性。结果表明：三菌株为蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus） 的不同菌株，三菌株在Genbank上的登录号分别为：eu915687、eu915686和eu915688。 三菌株在72 h内对初始浓度为50 mg/L甲基对硫磷的降解率分别达到91.7%、88.7%与 92.4%，菌株之间无显著性差异（P0.05）；在毒死蜱初始浓度为50 mg/L和100 mg/L时， HY-1和HY-4降解毒死蜱的能力和HY-2有显著性差异（P0.05），其中三菌株在72 h内对 100 mg/L毒死蜱的降解率分别达到64.8%、53.7%和59.5%；三菌株在72 h内对初始浓度 为100 mg/L三唑磷的降解率分布在13.3%–20.7%之间，其中HY-2对三唑磷的降解率较 高，并和其余两菌株有显著性差异（P0.05）。可以看出，蜡状芽孢杆菌的不同菌株对 有机磷农药的降解存在差异性。 2. 以单因素试验探讨了三菌株降解甲基对硫磷和毒死蜱的影响因素，得出了三菌株 降解有机磷农药的最适环境条件。结果表明：菌???HY-2能够利用甲基对硫磷和毒死蜱为 唯一磷源降解农药。HY-2降解甲基对硫磷的适宜条件为：培养温度30 °C–35 °C、初始 pH为6–8、甲基对硫磷初始浓度为10–50 mg/L、接种量20%（体积比，菌体密度：稀释  到菌悬母液（OD600=3.0）的0.8倍），添加葡萄糖不能促进菌株对甲基对硫磷的降解；HY-2 降解毒死蜱的适宜条件为：葡萄糖浓度6 g/L、培养温度30 °C–35 °C、初始pH为7、毒死 蜱初始浓度为80–200 mg/L、接种量20%（体积比，菌体密度：稀释到菌悬母液（OD600=3.0） 的0.8倍）。HY-1和HY-4两菌株降解毒死蜱的适宜条件为：葡萄糖浓度3 g/L、培养温度35 °C、初始pH为7–8、毒死蜱初始浓度80 mg/L、接种量20%（体积比，菌体密度：稀释到 所配菌悬母液（OD600=2）的0.5倍）。酵母膏含量对毒死蜱的降解影响表明，当添加3 g/L 的葡萄糖时，最适的酵母膏含量为1 g/L，而不添加葡萄糖时，最适的酵母膏含量为5 g/L。 在酵母膏试验浓度范围之内，不添加葡萄糖时菌株对毒死蜱的降解率最终也不能达到含 有葡萄糖的水平。 3. 采用种子液培养基中定量添加毒死蜱和定时取样分析毒死蜱残留浓度的方法，明 确了毒死蜱对蜡状芽孢杆菌的生长抑制动力学和菌株对毒死蜱的降解动力学，同时研究 了降解菌对高浓度毒死蜱的耐受度和菌胶团的形成能力。结果表明：HY-1、HY-2和HY-4 三菌株最适种子液培养时间分别为10、19和15 h。含毒死蜱培养液和空白对照相比，HY-1 和HY-2两菌株生长的适应期延长，对数期、稳定期顺序后延。随着培养液中菌体数量的 增长，培养液的pH也随之升高。接菌量为8%（V/V）时降解率最高。HY-1和HY-2两菌 株对不同浓度的毒死蜱表现出不同的降解规律。对于低浓度的毒死蜱，毒死蜱的浓度随 着时间的推移而下降；当毒死蜱浓度较高时，毒死蜱的降解过程包括吸附、解吸和降解 等几个阶段。一级动力学方程ln（C0/Ct） = kt可以用来拟合毒死蜱的降解动力学及确定 降解动力学参数。研究发现，菌