独活寄生汤及其拆方干预腰椎间盘纤维环细胞p38信号转导通路的生物学效应研究-中西医结合临床专业论文.docxVIP

目 录 中文摘要?????????????????????????Ⅰ ABSTRACT????????????????????????Ⅲ 前 言?????????????????????????? 1 一、实验材料与方法???????????????????? 2 （一）实验材料????????????????????? 2 1.实验动物 ?????????????????????2 2.实验药物 ?????????????????????2 3.药物制备 ?????????????????????2 4.实验室 ?????????????????????? 2 5.主要仪器 ?????????????????????2 6.主要试剂 ?????????????????????3 （二）实验方法????????????????????? 3 1.动物分组 ????????????????????? 3 2.造模方法 ?????????????????????3 3.制备含药血清 ????????????????????4 4.纤维环细胞的分离、培养与鉴定???????????? 4 5.含药血清刺激 ????????????????????5 6. p38 磷酸化蛋白 Western blot 检测???????????6 （三）统计方法????????????????????? 7 二、结果 ????????????????????????8 （一）细胞体外单层培养及观察?????????????? 8 （二）细胞的鉴定???????????????????? 8 （三）含药血清对纤维环细胞 p38 磷酸化水平的影响 ????? 8 三、分析与讨论 ?????????????????????10 （一）腰椎椎间盘退变动物模型的制作 ?????????? 10 （二）纤维环细胞的培养????????????????? 11 （三）腰椎退行性改变中纤维环细胞的 p38 磷酸化蛋白的表达? 11 （四）p38 阻断剂 SB203580 的作用 ???????????? 12 （五）独活寄生汤治疗椎间盘源性腰痛机制的研究?????? 12 四、小结 ????????????????????????15 五、结论 ????????????????????????16 参考文献????????????????????????? 17 附录 1???????????????????????????20 附图??????????????????????????? 23 致谢??????????????????????????? 25 文献综述????????????????????????? 26 中文摘要 独活寄生汤及其拆方干预腰椎间盘纤维环细胞 p38 信号转导通路的生物学 效应研究 目的 研究独活寄生汤及其拆方的含药血清，对退变的椎间盘纤维环细胞 p38MAPK 信号分子磷酸化水平的影响，并分析 p38MAPK 阻断剂对其磷酸化水平的抑制程度。 方法 将 30 只 3 月龄雄性新西兰大白兔随机分为 6 组，即空白对照组(生理盐水)、 独活寄生汤组、拆方 A 组（祛风湿、止痹痛组）、拆方 B 组（补气血、益肝肾组）、p38 阻断剂组、正常对照组。除正常对照组外其余 5 组，采用纤维环体表穿刺法建立兔腰椎 间盘退变模型；造模 8 周后，椎间盘纤维环细胞的培养与鉴定；独活寄生汤、拆方 A、 拆方 B、空白对照组血清及 p38 阻断剂 SB203580 的含药血清的提取；分别用含药血清 刺激退变的纤维环细胞，通过 Western blot 检测各组细胞的 p38 磷酸化蛋白的表达水平。 结果 正常组 p38 磷酸化水平最低，而空白模型组 p38 磷酸化水平最高。通过 SPSS16.0 软件组间 T 检验得出：空白组与其余 5 组比较有显著性差异(P0.01)；独活寄 生汤组除与拆方 B 组比较无显著性差异（P0.05），与其余四组比较均有显著性差异 （P0.01）；拆方 A 与其余 5 组比较有显著性差异（P0.01）；拆方 B 组除与全方组比较 无显著性差异（P0.05），与其余 4 组比较均有显著性差异（P0.01）；p38 阻断剂组与 其余 5 组比较均有显著性差异（P0.01）；正常组与其余五组比较均有显著性差异 （P0.01）。 结论 1、腰椎间盘退变模型中纤维环细胞有较高的 p38 磷酸化蛋白的表达；2、 p38MAPK 阻断剂 SB203580 对纤维环细胞 p38 信号转导通路有明显抑制作用；3、独活 寄生汤可以通过抑制 p38 信号转导通路磷酸化水平从而抑制炎性因子的产生及缓