活化转录因子3、4和ki―67在皮肤鳞癌中的表达意.docVIP

活化转录因子3、4和ki―67在皮肤鳞癌中的表达意 活化转录因子3、4和ki―67在皮肤鳞癌中的表达意 皮肤鳞癌和基底细胞癌是最常见的两种皮肤肿瘤，二者鉴别诊断主要依靠病理组织学。除此之外，临床最常用的辅助诊断方法通常选择免疫组化染色。而现有的常用蛋白标志物不足以起到有效的鉴别诊断作用。因此，尤其在病理诊断有困难的情况下，需要可靠的蛋白标志物来帮助正确区分这两类皮肤肿瘤，提高诊断水平。 活化转录因子3、4（ativating transriptin fatr 3、4，ATF3、4）是活化转录因子家族成员，在正常组织中表达较少，在一些肿瘤组织细胞中高表达。但在皮肤鳞癌和基底细胞癌中的表达、意义报道较少，作用机制不甚明确。Ki-67是临床上检测细胞增殖的常用指标之一。本文采用免疫组化染色的方法研究ATF3、4和ki-67皮肤鳞癌和基底细胞癌中的表达及临床意义。 1 材料和方法 1.1 病例资料 从笔者所在医院院病理科储存的蜡块库中选择皮肤鳞癌和基底细胞癌手术切除标本。纳入标准为病理诊断为皮肤鳞癌和基底细胞癌的患者，无年龄、性别、种族、病损部位限制。排除标准：同一疾病复发再手术患者；器官移植后发生皮肤肿瘤患者。通过调阅病案资料发现，2016年1月-2016年2月，笔者所在医院住院患者中（整形科、皮肤科）符合纳入和排除标准、确诊为皮肤鳞癌和基底细胞癌各有658和877人。其中皮肤鳞癌根据鳞状细胞分化程度分为高、中、低分化皮肤鳞癌。根据住院号按顺序编号，利用随机数字表随机选择皮肤鳞癌96例、基底细胞癌118例。两组患者年龄、性别、病损部位无统计学差异。 1.2 主要试剂 兔抗人ATF3、4、ki-67抗体（ 美国Aba公司，编号分别为ab176872，ab31390，ab66155）、SP试剂盒（含二抗、DAB显色剂，北京中杉金桥生物技术有限公司）。 1.3 免疫组化染色 石蜡包埋组织4 连续切片，常规37℃烘烤30in，后二甲苯、乙醇脱蜡、水化，3%过氧化氢溶液浸泡10in，阻断内源性过氧化物酶活性。ATF3、4采用高温抗原、EDTA修复 in，缓慢复温至室温水洗后PBS清洗3，每3 in，正常血清封闭15 in后加一抗（ATF3浓度为1：0；ATF4浓度为1：1；ki-67浓度为1：100），4℃过夜，PBS清洗3，每3 in。加生物素标记二抗，37℃孵育15 in，PBS洗涤3，每3 in；加DAB显色剂，苏木精复染，乙醇脱水，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照组。 1.4 判断标准 ATF3定位于胞核和（或核仁），ATF4定位于胞浆，阳性染色均为棕黄至棕褐色颗粒。每张切片在 0高倍视野下随机选择4个视野，计数阳性细胞数。采用阳性细胞比例和着色强度两项综合评定阳性结果，（0～+）不着色或淡黄色或阳性细胞数 10%；++黄色或阳性细胞数10%～%；+++棕黄色或阳性细胞数 %。Ki-67抗原的表达主要定位于细胞核， 阳性染色均为棕黄至棕褐色颗粒。不着色或阳性细胞数 10%者为-，淡黄色或阳性细胞数10%～24%为+，黄色或阳性细胞数%～49%者为++，棕黄色或阳性细胞数 %者为+++。 1.5 统计学方法 应用 SPSS17.0 统计软件包分析。对于ATF3、4和ki-67在皮肤鳞癌和基底细胞癌中的表达差别，运用ann-hitney Test进行假设检验。ATF3、4表达强度与皮肤鳞癌分化程度相关性，用Spearan秩相关系数描述并进行t检验。检验水准均为 0.05（双侧），P 0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 阳性表达结果 ATF3、ki-67阳性表达定位于细胞核和（或）核仁，ATF4阳性表达定位于胞浆，均呈淡黄色至棕黄色（图1）。 2.2 结果统计 皮肤鳞癌中ATF3着色细胞 10%占78%，相对表达强度在++及以上占%。基底细胞癌中ATF3的表达情况与此迥然不同，ATF3着色细胞 10%占61%（其中%由向鳞状细胞分化型构成），相对表达强度在++及以上占62%左右（其中27%由向鳞状细胞分化型构成）。ATF3在皮肤鳞癌和基底细胞癌中阳性表达细胞数和相对表达强度都有统计学差异（z=-3.014，P=0.003和z=-2.099，P=0.036）。类似的结果在ATF4中也可见到（z=-3.197，P=0.001和z=-2.276，P=0.023）。且ATF3、4的表达强度和皮肤鳞癌分化程度成正相关，即分化程度低越低，表达强度越高，r=0.395，P=0.000和r=0.303，P=0.001，（表2、3）。 2.3 统计学分析 Ki-67在皮肤鳞癌和基底细胞癌中阳性表达细胞数和相对表达强度无统计学差异，z=-0.362，P=0.718和z=-0.184，P=0.0.