精品幻灯片《细胞工程》4培养基及其配制.ppt

是植物离体培养中的营养和能量来源，也是人们调节和控制培养物生长发育的重要因子。 是离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供的近似生物体内生存的营养环境。;;;;第三节 培养基及其配制;1. 无机元素;大量元素;无机元素的作用;;;;B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。 ;2. 有机元素（氨基酸、维生素、糖类…; 是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。 ;②维生素类;;③糖类;;肌醇又叫环己六醇;;④天然有机添加物;3. 植物生长调节物;3. 植物生长调节物;在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。在促进生长方面，根对生长素最敏感，在极低的浓度下，就可促进根生长，其次是茎和芽。天然的生长素热稳定性差，高温高压或受光条件易被破坏。在植物体内也易受到体内酶的分解。一般生长素浓度的使用为0.05－5mg／L。;;;;②细胞分裂素类;在培养基中添加细胞分裂素有三个作用： 诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。 促进细胞分裂与扩大。 抑制根的分化。; 生长素与细胞分裂素：它们的比例决定着发育的方向，是愈伤组织、长根还是长芽。如为了促进芽器官的分化，应除去或降低生长素的浓度，或者调整培养基中生长素与细胞分裂素的比例。 ;生长素/细胞分裂素比例; 有20多种，培养基中添加的是GA3，主要用于促进幼苗茎的伸长生长，促进不定胚发育成小植株。此外，赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。但赤霉素不耐热，水溶后不稳定，故应采用过滤除菌，并用酒精溶解。;④脱落酸;⑤乙烯;4. 琼脂;4. 琼脂;琼脂;其它;5. 水;;抗生物质 抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5—20mg/L之间。添加抗生物质可防止菌类污染，减少培养中材料的损失。对于刚感染的组织材料，可向培养基中注入5%—10%的抗菌素。;活性炭;活性炭的应用： ⑴茎尖初代培养，可以吸附外植体产生的致死性褐化物，一般为0.1%—0.2%，不能超过0.2%。 ⑵活性炭在生根时有明显的促进作用，可能是通过减弱光 照保护IAA。 ⑶降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃苗有良好作用，一般浓度为0.3%。; 研究表示，每毫克的活性炭能吸附l00ng左右的生长调节物质，这说明只需要极少量的活性炭就可以完全吸附培养基中的调节物质。大量的活性炭加入会削弱琼脂的凝固能力，因此要多加一些琼脂。很细的活性炭也易沉淀，通常在琼脂凝固之前，要轻轻摇动培养瓶。;二、 培养基种类;培养基种类;;;MS基本培养基配方;;三、培养基的配制;1. 培养基母液的配制;②培养基母液的配制; 母液配制的药品与器材;;(1).无机大量母液(扩大10倍配1L );MS培养基配方;硼酸，硫酸铜， 硫酸锰，硫酸锌， 氯化钴，钼酸钠， 碘化钾;;;(3)、铁盐（扩大100倍1000ml）;(4)、有机物（扩大50倍1000ml）;有机元素;(5)、激素母液（常用的）;;;母液的保存;2. 培养基的配制;培养基配制（以1L百合继代培养基为例）;配制步骤;培养基的分装与灭菌;;动物培养基及其配制;;;按来源，动物培养基可分为：;（一）培养基成分;（二???培养基配制;（三）培养基的选择;（四）动物细胞体外培养的其他液