中国药典2010年版微生物限度检查及发展趋势J-马仕洪课件.ppt

中国药品生物制品检定所 2010年版微生物限度检查法修订 16、附录111页，增加：白色念珠菌 若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色，挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温80玉米琼脂培养基上，培养24～48小时。取培养物进行染色，镜检及芽管试验。 芽管试验　挑取1%吐温80玉米琼脂培养基上的培养物，接种于加有一滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置湿润的平皿内，置35～37℃、1～3h，置显微镜下观察，可见到由孢子长出短小芽管。 若上述疑似菌为非革兰阳性菌，显微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管，判供试品未检出白色念珠菌。 中国药品生物制品检定所 2、技术现状与标准化 1）培养基 培养基质量标准。 MUG凝集、效价测定用培养基琼脂含量过高。 固体培养基的灵敏度。 2010年版培养基适用性实验 玫瑰红钠琼脂培养基的专属性 中国药品生物制品检定所 实验菌株 实验用菌液制备 需氧菌计数 霉菌及酵母菌计数 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕 大豆酪胨琼脂或大豆酪胨肉汤，30～35℃培养18～24小时 大豆酪胨琼脂和大豆酪胨肉汤，≤100cfu 30～35℃，≤3天 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10104〕 大豆酪胨琼脂或大豆酪胨肉汤，30～35℃培养18～24小时 大豆酪胨琼脂和大豆酪胨肉汤，≤100cfu 30～35℃，≤3天 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)〔CMCC（B）63501〕 大豆酪胨琼脂或大豆酪胨肉汤，30～35℃培养18～24小时 大豆酪胨琼脂和大豆酪胨肉汤，≤100cfu 30～35℃，≤3天 白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98001〕 沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤，20～25℃培养2～3天 大豆酪胨琼脂，≤100cfu 30～35℃，≤5天 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu，20～25℃， ≤5天 黑曲霉(Aspergillus niger)〔CMCC(F)98 003〕 沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖琼脂，20～25℃培养5～7天，或直到获得良好的孢子 大豆酪胨琼脂，≤100cfu 30～35℃，≤5天 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃，≤5天 培养基适用性实验（协调案） 中国药品生物制品检定所 检查目标菌 推荐培养基 特性 测试菌株* 耐胆盐革兰阴性菌 肠道菌增菌肉汤 促生长能力 E.coli、P.aeruginosa 抑制能力 S.aureus 紫红胆盐葡萄糖琼脂 促生长能力+指示能力 E.coli、P.aeruginosa 大肠埃希菌 麦康凯肉汤 促生长能力 E.coli 抑制能力 S.aureus 麦康凯琼脂 促生长能力+指示能力 E.coli 沙门菌 RVS肉汤 促生长能力 S paratyphi B 抑制能力 S.aureus 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 促生长能力+指示能力 S paratyphi B 指示能力 E.coli 铜绿假单胞菌 溴化十六烷基三甲铵琼脂 促生长能力 P.aeruginosa 抑制能力 E.coli 金黄色葡萄球菌 甘露醇盐琼脂 促生长能力+指示能力 S.aureus 抑制能力 E.coli 梭菌 梭菌增菌培养基 促生长能力 Cl. sporogenes 哥伦比亚琼脂 促生长能力 Cl. sporogenes 白色念珠菌 沙氏葡萄糖肉汤 促生长能力 C.albicans 沙氏葡萄糖琼脂 促生长能力+指示能力 C.albicans 中国药品生物制品检定所 玫瑰红钠琼脂培养基的专属性 以中检所玫瑰红钠琼脂培养基（批号：050428 ）与营养琼脂培养基（批号：050523 ）比较，加入50～100cfu阳性菌在相同条件培养观察，见下表9： 　 大肠 铜绿 金葡 枯草 营养琼脂培养基35℃培养48hrs 75 81 91 79 玫瑰红钠琼脂培养基35℃培养48hrs 57 47 0 0 玫瑰红钠琼脂培养基25℃培养72hrs 45 41 0 0 表10、玫瑰红钠琼脂培养基专属性实验结果 中国药品生物制品检定所 2、技术现状与标准化 2）、自动化程度低，仍然依赖大量的人工 以方法验证为基础，引入更为便捷的供试品前处理技术，规范供试品前处理 有条件的地方可以考虑引入自动稀释、自动接种、仪器判读结果等设备和技术 3）、75mm薄膜过滤器的研制 征对我国中成药品种多、情况复杂，开发研制的75mm薄膜过滤器在目前的验证工作中发挥了重要作用（图16～17）。 中国药品生物制品检定所 3、微生物限度检查的几个问题 原料药的微生物标准问题； 药材原粉的界定问题； 含豆豉、神曲等发酵成分的中成药制剂标准问题； 纯化水微