289例结核感染患者外周全血TSPOT.TB检测和结核抗体IgM比较结果分析.docVIP

289例结核感染患者外周全血TSPOT.TB检测和结核抗体IgM比较结果分析 　　[摘要] 目的 分析T-SPOT.TB检测结核感染的敏感度和特异性，其作为快速、准确的检测手段，给临床提供诊断依据，控制结核感染蔓延新法。 方法 选择本院门诊及住院的结核病患者289例，分别进行T-SPOT.TB及结核抗体IgM检测。 结果 外周血检测T-SPOT.TB阳性263例，结核抗体IgM检测阳性243例，对照阳性率：T-SPOT.TB检测阳性率为91.0%（263/289），结核抗体IgM检测阳性为84.1%（243/289），经统计学处理P 0.05，T-SPOT.TB检测优于结核抗体IgM检测。T-SPOT.TB优于结核抗体IgM检测，T-SPOT.TB检测诊断，可在保持高灵敏性，高特异性的同时，进一步提高结核分枝杆菌检出率。 结论 对早期诊断可获得较好治疗效果的肺结核和肺外结核患者，该选择灵敏度高，特异性强，T-SPOT.TB快速检测有一定优势。 　　[关键词] 结核分枝杆菌；血液检测；酶联免疫斑点技术；结核抗体 　　[中图分类号] R446.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）05（a）-0104-02 　　结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，它起源早、流行广，至今仍未得到有效的控制[1]。结核杆菌可侵犯机体多个器官，临床表现多样。患者标本涂片抗酸染色及痰培养找结核杆菌是确认结核病的主要依据[2-3]，但其检出率低[4]，需要有其他方法提高结核病的诊断。本资料对结核病患者进行外周全血T-SPOT.TB检测与结核抗体IgM比较，探讨提高结核病诊断的新方法。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取2012年1月～2012年12月于本院门诊及住院的结核病患者289例，所有病例根据其感染部位按全国结核病细菌等操作规程[5]采集标本（包括痰、胸腹水、脑脊液），所有病例相关标本进行抗酸染色[6]及痰培养均阳性。 　　1.1.1 性别和年龄构成 男性156例占54.0%，女性133例占46.0%；年龄14～20岁16例占5.5%，21～30岁75例占26.0%，31～40岁60例占20.8%，41～50岁59例占20.4%，51～60岁30例占10.4%，61～70岁34例占11.8%，71～80岁15例占5.2%。 　　1.1.2 疾病 289例患者中肺结核113例，结核性胸膜炎61例，结核性腹膜炎39例，结核性脑膜炎42例，2个及以上系统结核感染34例。 　　1.2 原理与方法 　　1.2.1 实验原理 T-SPOT.TB是利用结核特异抗原（ESAT-6CFP-10），通过酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测受试者，体内是否存在结核效应T淋巴细胞，从而判断目前该受试者是否感染结核杆菌（现症感染）。结核抗体IgM采用ELISA法检测。 　　1.2.2 方法 采血送检（时间要求）与方法。 　　采集外周全血，无须空腹，需用肝素/肝素锂/肝素钠抗凝，不使用EDTA抗凝，2岁以下儿童2～3 mL血，其他患者4～6 mL，免疫力低下患者6～8 mL，样本温度控制15～25℃，保持与运输不得冷冻/冷藏，样本采集4 h内送到实验室，8 h内完成检测，1周内有输血史或做PET-CT的患者会影响血液中淋巴细胞的分离，建议2周后再行检测，运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果。 　　1.2.3 操作流程 （1）外周抗凝全血梯度离心分离PBMCSC（外周血单个核细胞）。（2）结核特异抗原CESAT—6/CFP刺激结核特异的效应T淋巴细胞，使其分泌γ干扰素。（3）效应T淋巴细胞分泌的γ干扰素与膜板预包被的抗-干扰素抗体结合并固定在细胞周围。（4）位统的ELISA“双抗夹心法”，使抗原抗体结合物显色，形成斑点，进行对照阴性和阳性结果。 　　1.3 判断标准 　　1.3.1 阳性结果参照以下标准 空白对照孔斑点数为0～5个时且抗原A或抗原B孔的斑点数≥量6。 　　1.3.2 阴性结果 空白对照孔斑点数为6～10个时且抗原A或抗原B孔的斑点数≥2×（空白对照孔斑点数）如果上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为阴性。 　　1.4 影响检测结果因素 　　1.4.1 阴性结果 提示患者体内不存在针对结核杆菌特异性的效应T细胞，如出现以下情况，阴性不能排除感染的可能，（1）因感染阶段不同（如标本是细胞免疫发生前获取的）引起的做阴性结果。（2）少数免疫系统功能不全，疾病的情况，如HIV感染者、肿瘤患者、儿童等。（3）以及其他免疫等，实验非正常操作差异。 　　1.4.2 阳性结果 提示患者体内存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，患者存在结核感染。但是否为活动性结核病，需结合临床症状