不同种类白条天牛基因条形码特征和系统发育初探.docVIP

不同种类白条天牛基因条形码特征和系统发育初探 　　摘要：白条天牛属的天牛是一类严重危害多种林木的蛀干害虫。为了丰富白条天牛属线粒体CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因数据库，探索该属各种类的系统发育关系，以利于用CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因作DNA条形码快速准确地鉴定白条天牛种类。应用PCR技术扩增3种白条天牛标本的CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]序列，并与GenBank记录的4种白条天牛CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]序列进行比对，以分析其序列组成变异及碱基替换规律，最后利用MEGA 5.0构建系统进化树。结果显示，白条天牛的亲缘关系与地理分布有关，同一国家的白条天牛之间的亲缘关系较近，不同国家的白条天牛之间的亲缘关系较远。 　　关键词：白条天牛；CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因；基因条形码；系统发育关系 　　中图分类号： S433.5文献标志码： A[HK] 　　文章编号：1002-1302（2017）13-0090-04[HS）][HT9.SS] 　　收稿日期：2016-03-18 　　基金项目：江苏省出入境检验检疫局科技计划项目（编号：2014KJ48）。 　　作者简介：禹海鑫（1984―），男，河南泌阳人，博士，农艺师，主要从事植物检疫、昆虫分类和昆虫分子化学生态学研究。Tel：（0513E-mail：haixin.007@163.com。 　　[ZK）] 　　沟胫天牛亚科（Laniinae）隶属于鞘翅目（Cleoptera）天牛科（Cerambycidae），是天牛科种类数目最多的一个亚科，全世界已知种类大约20 000种。其中白条天牛属（Batocera）昆虫是该亚科内十分重要的一类林木害虫，它的幼虫钻蛀取食树木的树干及枝条的木质部、韧皮部，可危害柳树、苹果树、栎树、杨树等多个阔叶树种，给农林业生产造成极大的经济损失[1-2]。全世界白条天牛种类约有60种，广泛分布在非洲、澳大利亚、亚洲和东欧地区。我国约有12种，包括锈斑白条天牛（B. numitor Newman）、麻栎白条天牛（B. quercinea Wang et Zhang）等[2-3]。除上述12种外，余下约50种在我国是没有分布的，被2007年发布的《进境植物检疫性有害生物名录》列为我国检疫性昆虫[2]。 　　近年来，随着我国外向型经济的持续发展，原木和木质包装进出口数量剧增，我国多个口岸在进境木材检疫查验中截获了白条天牛。例如，2009年乍浦口岸检疫人员从马来西亚进境原木中首次截获托氏白条天牛（B. thomsoni）[4]。2012年张家港口岸从巴布亚新几内亚原木中截获白条天牛B. laena[5]。另据相关媒体报道，2013年张家港口岸从非洲原木中截获到白条天牛B. wyllei[6]。2014年，吴江口岸在进境原木中截获了婆罗白条天牛（B. tigris）[7]。 　　目前，昆虫种类鉴定以形态学鉴定为主，但可用于形态比较的特征数量有限且不稳定，同时国门口岸截获的昆虫往往是以卵、幼虫、蛹或肢体残缺虫态出现，传统的形态学鉴定方法显然不适用[8]；因此，需要探索新方法来解决传统形态学鉴定中遇到的困境。随着分子试验技术的迅猛发展，利用DNA序列研究遗传进化、系统发育及种类鉴定已经成为昆虫学研究的热点。其中，基于线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（mtDNA COⅠ）基因序列的DNA条形码技术是当前相对成熟的分子鉴定技术[9]。花婧等通过此技术对大小蠹属17个种进行了分子鉴定[10]。Stauffer等利用该技术，实现了对欧洲7种齿小蠹的快速鉴定[11]。 　　本研究对已获得的6种白条天牛的CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因片段进行测序和对比，分析这些CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]序列（即DNA条形码）的特征及遗传系统发育关系，以获得能准确鉴定白条天牛种类的分子方法，为研究其他天牛种类的分子鉴定方法提供有益参考[12]。 　　1材料与方法 　　1.1昆虫标本 　　本试验所用的标本由南通出入境检验检疫局有害生物检疫实验室提供，包括锈斑白条天牛（B. davidis）、橙斑白条天牛（B. numitor）、印尼白条天牛（B. celebiana）3种白条天牛，所有天牛标本均经国内天牛专家安榆林研究员鉴定。标本来源与采集时间如表1所示。另外，从GenBank网站获得4种白条天牛共7条CO[QX（Y15]Ⅰ[QX）]序列（表2）用于比对。其中，印尼白条天牛（B. celebiana）是在我国没有分布的国外种类，余下3种天牛在我国均有分布。 　　1.2提取基因组DNA 　　采用从北京金麦格生物技术有限公司购买的GenMagBio动物细胞组织/细胞基因组DNA磁珠提取试剂盒提取各样品的基因组DNA