氨基酸与tRNA的连接.PPT

辽宁医学院 辽宁医学院 Met 40S Met Met 40S 60S mRNA eIF-2B、eIF-3、 eIF-6 ① elF-3 ② GDP+Pi 各种elF释放 elF-5 ④ ATP ADP+Pi elF4E, elF4G, elF4A, elF4B,PAB ③ 真核生物翻译起始复合物形成过程 Met-tRNAiMet-elF-2 -GTP Met 60S 真核生物翻译起始的特点 核蛋白体是80S； 起始因子种类多； 起始tRNA的Met不需甲酰化； mRNA的5’帽子和3’poly A尾结构与mRNA在核蛋白体就位有关； 起始tRNA先与核蛋白体小亚基结合，然后再结合mRNA 真核生物翻译起始复合物的装配 翻译起始复合物形成后，核糖体从mRNA的5?端向3?端移动，依据密码子顺序，从N端开始向C端合成多肽链。 二、在核糖体上重复进行的三步反应延长肽链 1. 进位(positioning)/注册(registration) 2. 成肽(peptide bond formation) 3. 转位(translocation) 肽链延长在核糖体上连续循环式进行，又称为核糖体循环(ribosomal cycle)，包括以下三步： 每轮循环使多肽链增加一个氨基酸残基。 1. 进位 又称注册(registration)， 是指一个氨基酰-tRNA按照mRNA模板的指令进入并结合到核蛋白体A位的过程。 辽宁医学院 进位需要延长因子EF-Tu与EF-Ts参与。 辽宁医学院 Tu Ts GTP GDP A U G 5 3 Tu Ts GTP 进位的反应过程： 2.成肽 成肽是在转肽酶(peptidase)的催化下，核蛋白体P位上起始氨基酰-tRNA的N-甲酰甲硫氨酰基或肽酰-tRNA的肽酰基转移到A位并与A位上氨基酰-tRNA的α-氨基结合形成肽键的过程。 成肽是指肽基转移酶（转肽酶）催化两个氨基酸间肽键形成的反应。 成肽的反应过程 EF-G有转位酶（translocase）活性，可结合并水解1分子GTP，释放的能量促进核蛋白体向mRNA的3′侧移动，使起始二肽酰-tRNA-mRNA相对位移进入核蛋白体P位，而卸载的tRNA则移入E位。 3.转位 指的是核糖体沿着mRNA的移位。 真核生物肽链合成的延长过程与原核生物基本相似，但有不同的反应体系和延长因子。 另外，真核细胞核蛋白体没有E位，转位时卸载的tRNA直接从P位脱落。 移位的结果是： ① 成肽后位于P 位的tRNA所携带的氨基酸或肽在反应中交给了A位上的氨基酸，空载的tRNA从核糖体直接脱落； ② 成肽后位于A位的带有合成中的肽链的tRNA（肽酰-tRNA）转到了P位上； ③ A位得以空出，且准确定位在mRNA的下一个密码子，以接受一个新的对应的氨基酰tRNA进位。 转位需要延长因子参与。 fMet A U G 5 3 fMet Tu GTP 成肽→转位→下一轮进位 进位 转位 成肽 肽链合成延长(核蛋白体循环)过程 真核生物肽链延长过程 肽链上每增加一个氨基酸残基，就需要经过一次进位、成肽和转位反应。如此往复，直到核糖体的A位对应到了mRNA的终止密码子上。 终止密码子不被任何氨基酰-tRNA识别，只有释放因子RF能识别终止密码子而进入A位，这一识别过程需要水解GTP。 三、终止密码子和释放因子导致肽链合成停止 原核生物有3种RF RF1识别UAA或UAG，RF2识别UAA或UGA，RF3则与GTP结合并使其水解，协助RF1与RF2与核糖体结合。 真核生物仅有eRF一种释放因子， 所有3种终止密码子均可被eRF识别。 真核生物中肽链合成完成后的水解释放过程尚未完全了解。 辽宁医学院 原核肽链合成终止过程 多聚核糖体的形成可以使蛋白质生物合成以高速度、高效率进行。 多聚核糖体(polysome) 1条mRNA模板链都可附着10～100个核蛋白体，这些核糖体依次结合起始密码子并沿5?→3?方向读码移动，同时进行肽链合成，这种mRNA与多个核糖体形成的聚合物称为多聚核糖体(polysome) 。 多聚核糖体 电镜下的多聚核糖体 原核生物与真核生物肽链合成过程的主要差别 原核生物 真核生物 mRNA 一条mRNA编码几种蛋白质（多顺反子） 一条mRNA编码一种蛋白质（单顺反子） 转录后很少加工 转录后进行首尾修饰及剪接 转录、翻译和mRNA的降解可同时发生 mRNA在核内合成，加工后进入胞液，再作为模板指导翻译 核蛋白体 30S小亚基＋50S大亚基 ? 70S核蛋白体 40S小亚基＋60S大亚基 ? 80S核蛋白体 起始阶段 起始氨基酰-tRNA为fMet-