人参皂苷Ro碱水解动力学的研究及水解产物结构解析.docVIP

人参皂苷Ro碱水解动力学的研究及水解产物结构解析 　　[摘要] 研究人参皂苷Ro在碱性条件下的稳定性，考察了不同温度不同pH下人参皂苷Ro的水解情况，结果发现水解符合一级动力学反应。水解速率与水解温度和水解体系的pH相关，相同的水解温度，pH越高，水解越快；相同的pH，温度越高水解越迅速。对水解产物进行分离，通过质谱、核磁等手段鉴定水解产物为姜状三七皂苷R1（zingibroside-R1）。该研究为评价人参皂苷Ro环境特性提供一定依据，也为姜状三七皂苷R1的制备提供一种方法。 　　[关键词] 人参皂苷Ro；水解动力学；结构解析；姜状三七皂苷R1 　　[收稿日期] 2013-10-09 　　[通信作者] *柳文媛，教授，博士生导师，E-mail：liuwenyuan8506@163.com；*叶正良，研究员，硕士生导师，E-mail：yezl@ 　　[作者简介] 朱琼，硕士研究生，E-mail：happyzhuqiong@126.com 　　人参皂苷Ro（ginsenoside-Ro）为齐墩果烷型人参皂苷，又被称为竹叶参Ⅴ，存在于人参[1]、牛膝、竹叶参中[2]。具有表面活性剂作用，对柴胡皂苷具有增溶的作用[3]，能促进细胞增生，调节小鼠脾细胞Th1/Th2型细胞因子的产生[4]，能促进毛发生长[5-6]，人参皂苷Ro还能抑制5α-还原酶和抗慢性心绞痛的作用[7]。人参皂苷Ro不稳定[8]，在加热条件中酯苷键易破坏，这种报道大多集中在定性分解及通过结构物质推测其产物。人参皂苷Ro结构中含有酯苷键，在碱性条件中易发生水解，但目前尚无人参皂苷Ro在碱性条件下的水解动力学研究报道。本文主要为了研究人参皂苷Ro在碱性条件下的结构和含量变化规律，为含有人参皂苷Ro的中药制剂的生产过程控制提供参考，也为含有人参皂苷Ro的中药制剂稳定性评价提供依据。因此本文进行了人参皂苷Ro在碱性条件下的水解动力学研究，并且对碱水解产物的结构进行了结构鉴定。 　　1 材料 　　人参皂苷Ro对照品（天津马克生物科技有限公司，纯度为99%，批；氯仿为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯（德国Merck公司），磷酸为色谱纯（天津市光复精细化工研究所），超纯水为实验室自制；Waters e2695高效液相色谱仪，Waters 2489紫外检测器，岛津UFLC-IT-TOF，Bruker 400M 核磁共振仪，Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司），XS105梅特勒精密电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。 　　2 方法与结果 　　2.1 人参皂苷Ro水解产物测定 　　2.1.1 色谱检测条件 Waters Symmetry C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈-0.05%磷酸；梯度洗脱，0～20 min，30%～70%乙腈；流速1 mL·min-1；检测波长203 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。人参皂苷Ro水解结果见图1。 　　1.空白；2.对照品；3.水解样品；a.人参皂苷Ro；b.姜状三七皂苷R1。 　　图1 人参皂苷Ro水解HPLC图 　　Fig.1 HPLC chromatogram of the hydrolysis kinetics of ginsenoside-Ro 　　2.1.2 标准曲线的绘制 取人参皂苷Ro对照品适量，配制成质量浓度为0.60 g·L-1的储备液，分别稀释5，10，20，40，80，160倍，分别吸取上述不同质量浓度的人参皂苷Ro对照品10 μL进样，测定其峰面积。以人参皂苷Ro的进样质量为横坐标（X），色谱峰的峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得标准曲线方程Y=3 346 554X+174 456，（r=0.999 9，n=6），表明人参皂苷Ro在3.75×10-3～ 0.12 g·L-1呈良好的线性关系。 　　2.1.3 检测限的测定 取人参皂苷Ro适量，配制成合适浓度，进样检测，当信噪比为3时，检测浓度为3.73 ng。 　　2.1.4 定量限的测定 取人参皂苷Ro适量，配制成合适浓度，进样检测，当信噪比为10时，该浓度为14.92 ng。且将该浓度的人参皂苷Ro对照品连续进样6次，其RSD为0.7%，说明定量准确。 　　2.1.5 精密度试验 吸取人参皂苷Ro对照品溶液10 μL，连续进样6次，其RSD为0.4%，表明测定条件精密度良好。 　　2.1.6 稳定性试验 将人参皂苷Ro对照品溶液放置0，2，4，8，12，24 h后分别测定其峰面积，RSD为1.7%，表明溶液稳定性良好。 　　2.2 人参皂苷Ro碱水解动力学模型的建立 　　2.2.1 水解实验过程 取人参皂苷Ro对照品适量，精密称定，置于25