高糖对大鼠肾小管上皮细胞差异蛋白组学研究-外科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 说 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解河北联合大学有关保留 、使用学位论文的规定， 即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文 ，学校有权保 留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论 文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检 索和交流。 □ 授学位之日起 □ 自 年 月 日起 作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 摘 要 摘 要 目的 本实验通过对高糖作用下大鼠肾小管上皮细胞蛋白质组学动态变化的观察， 了解高糖环境对大鼠肾小管上皮细胞蛋白质成分的影响，从而希望找到糖尿病肾病 发生发展的机制。 方法 1 将肾小管上皮细胞分别置于含正常糖浓度组（含糖5.5mM）、高糖组（含 糖 30mM）的培养基中进行体外培养，分别在8小时、72小时、25天后分别提取细 胞总蛋白。2 将分离的总蛋白运用双向电泳技术进行分离。3 分离后的凝胶应用 Image Master 2D Platinum6.0软件对其2-DE图像进行分析，通过统计学方法评价双向 凝胶电泳结果的重复性和可靠性，运用方差不对齐的t检验获得P值，P0.05并且该 点 的 volume% 值 变 化 超 出 2 倍 作 为 标 准 ， 找 出 差 异 蛋 白 点 。 4 通 过 质 谱 技 术 （MALDI-TOF, MALDI-TOF-TOF, LC-MS-MS）对找出的差异蛋白点进行鉴定，然 后对鉴定出的差异蛋白进行生物信息学分析。5 利用MASCOT 数据库进行检索， 其差异蛋白点的判定标准是以得分大于60，并且覆盖序列大于 15%，测量与预测分 子量之间相差小于30% ，测得的等电点与预测等电点相差小于2.0。最后再利用 PUBMED 查询差异蛋白的功能。 结果 1 双向电泳凝胶平均获得了蛋白点956.33±21.37个，832个点在所有胶上均出 现，匹配率为87%。2 运用双向电泳技术分析高糖及正常培养基的肾小管上皮细胞 的蛋白组学，发现8个差异蛋白点经过矫正后（P0.05）通过质谱鉴定，它们分别 是：膜突蛋白（moesin），膜联蛋白A4（annexin A4），电压依赖性阴离子通道蛋 白2（voltage-dependent anion-selective channel protein 2 VDAC2），磷酸变位酶1 （phosphoglycerate mutase 1），细胞核酸结合蛋白2（cellular nucleic acid-binding protein isoform 2），基质细胞衍生因子2-类蛋白1前体（stromal cell-derived factor 2- like protein 1 precursor，SDF2L1） ，加帽 蛋白，凝 溶胶 蛋白样 ，异构 型CRA_b （capping protein, gelsolin-like, isoform CRA_b），核苷二磷酸激酶A（nucleoside diphosphate kinase A）。 结论 通过对蛋白组学的研究，找出了 8 种差异蛋白，提示这些蛋白的上调或下 调与高糖环境密切相关，为糖尿病肾病的机制研究提供了新的思路。 - I - 河北联合大学硕士生论文 图 9 幅；表 14 个；参 78 篇。 关键词 高糖；肾小管上皮细胞；蛋白组学 分类号：R692.6 II - 摘 要 Abstract Objective To understand the effect of high glucose on rat renal tubular epithelial cells protein through observing their dynamic proteomics change under high glucose environment, thereby hoping to find mechanisms for the development of diabetic nephropathy. Methods 1 As the tubular epithelial cells cultured in different based training , including nor