阿魏酸钠对幼大鼠心肌柔红霉素损伤的保护效应及其机制-生理学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 4 MTT NF-Κ b Thiazolyl tetrazolium bromide Nuclear factor Κ b 四甲基偶氮唑蓝 核转录因子 Κ b PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应 PDTC PMSF Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate Phenylmethanesulfonyl fluoride NF-κ B 抑制剂 苯甲基磺酰氟 PVDF Polytetrafluoroethene 聚偏二氟乙烯 RT reverse transcription 逆转录 RyR2 Ryanodine receptor 2 雷诺丁受体 2 SERCA2 sarco(endo)plasmic reticulum ca2+-ATPase 肌浆网钙 ATP 酶 2 SOD Superoxide dismutase 超氧化物歧化酶 中文摘要 阿魏酸钠对幼大鼠心肌柔红霉素损伤的保护效应及其机制 目的 探讨阿魏酸钠(SF)对柔红霉素(DNR)损伤心肌的保护效应，并探讨其机制。 方法 【体内】雄性 SD 大鼠，22±2 日龄，体重 60～80g，70 只随机分 7 组（n=10）。 正常对照组(Control)、模型组(DNR)、不同剂量（12.5、25、50、100、200mg/Kg）SF 干预组。Control 组,大鼠腹腔注射生理盐水（NS，5ml/Kg），每周 1 次，共 5 次；DNR 组、不同剂量 SF 干预组，5 次腹腔注射均为 DNR （2.5mg/Kg）。其中 Control 组、DNR 组自第 1 次注射 DNR 开始腹腔注射 NS(5ml/kg.d),不同剂量 SF 干预组分别腹腔注射不 同剂量（12.5、25、50、100、200mg/kg.d）SF，均连续 30d。各组大鼠在末次给药后 第 5d，取血浆测 LDH 和 CK 含量、描记分析大鼠体表心电图、左心室插管测大鼠左心 室血流动力学指标（HR、LVSP、LVDP、+dp/dtmax 和–dp/dtmax），取心肌组织测 SOD 和 MDA 含量、HE 染色观察心肌组织学结构、电镜检测心肌细胞超微结构；TUNEL 法检测 心肌细胞凋亡；Real-time PCR 检测心肌 cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、、 Caspase 9 和 Caspase 3 基因表达；免疫印迹检测心肌β -Tubulin、CaM、cTnI 蛋白 表达和线粒体 Cyt-c 释放。 【体外】采用 H9C2 大鼠心肌细胞株柔红霉素（DNR）1μ M 处理 24h，建立心肌细 胞 DNR 损伤体外实验模型。MTT 法检测细胞存活率，检测心肌细胞培养上清 LDH 和 CK 含量，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，DCF-DA 荧光试剂法检测心肌细胞内活性氧 i（ROS）的含量，Flou-3 荧光试剂法检测心肌细胞 [Ca2+] 含量，Real-time PCR 检测 心肌细胞 cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase 9 和 Caspase 3 基因表达， 免疫印迹检测心肌细胞β -Tubulin、CaM、cTnI、p38 MAPK、细胞核 NF-κ B 蛋白表达 和线粒体 Cyt-c 释放。 i 结果 【体内】幼大鼠腹腔注射 DNR 5 次累积剂量 12.5mg/kg 造成幼大鼠心肌 DNR 损伤， 表现为大鼠一般状态差、体重不增、甚至死亡，心肌酶外漏，体表心电图非特异性改 变，左心室收缩舒张功能下降，心肌组织和心肌细胞超微结构损伤，心肌细胞凋亡， 心肌组织 MDA 升高、SOD 降低，心肌 cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase 9 和 Caspase 3 基因表达、心肌β -Tubulin、CaM、cTnI 蛋白表达改变，线粒体 Cyt-c 释放增加。SF 干预呈剂量相关性地保护幼大鼠心肌减轻 DNR 损伤。 i【体外】H9C2 大鼠心肌细胞 DNR1μ M 作用 24h 造成心肌细胞 DNR 损伤，表现为心 肌细胞存活率降低，细胞培养上清 LDH 和 CK 含量增高，细胞凋亡率升高，细胞内 ROS、 [Ca2+] 升高，cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase 9 和 Caspase 3 基因 表达、β -Tubulin、CaM、cTnI、p38MAPK、细胞核 NF-κ B 蛋白表达改变，线粒体 Cyt-c 释放增加。SF(15.625～62.5Μ m)与 1μ M DNR 共孵育 H9C2 大鼠心肌细胞 24h，SF 呈剂 量相关性地保护心肌细胞减轻 D