微生物发酵工程实验指导 质量工程.docVIP

PAGE 第 2 - 页 共 NUMPAGES 13 页 第 1 - 页 共 NUMPAGES 14 页 微生物发酵工程实验指导 王金华 实验规则 1、实验前必须预习实验指导书。若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。 2、实验前须认真检查仪器、试剂、用具及实验材料。如有破损、短缺应立即报告指导教师，经同意后方可调换和补充。对玻璃器皿须做好清洗工作。 3、实验过程中不得随便挪动外组的仪器、用具和实验材料。不得随意拨动仪器开关或电源开关，须按实验要求进行。 4、实验材料、药品的使用，应在不影响实验结果的前提下注意节约，杜绝浪费。 5、实验室应保持肃静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。 6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。 7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。如有疑问，应向指导教师询问清楚后方可进行。 8、实验完毕后，须将玻璃仪器、用具等清洗干净，按原来的位置摆设放置。如有破损须报告指导教师，并填写仪器损坏登记簿。 9、在进行实验过程中，不得随意食用原料和加工品。 10、实验结束后，由值日生负责打扫实验室，保持室内整洁，注意关上水、电、窗、门。 实验一 培养基的配制及灭菌 一、实验目的要求 掌握不同类型微生物培养基的配方及其制备方法。 二、仪器设备及原材料 高压灭菌锅，250ml三角瓶，纱布，牛皮纸，琼脂，其他化学药品 三、常用培养基的配方及制备 1、细菌常用培养基 （1）LB培养基 蛋白胨 1.0% 酵母膏 0.5% NaCl 1.0% 可溶性淀粉 0.5% 琼脂 2.0% pH 7.0 121.3℃ （2）MRS（乳酸菌分离） 牛肉膏0.5% 酵母膏0.5% 蛋白胨1% 葡萄糖1% 乳糖0.5% NaCl 0.5% 琼脂2% pH6.8 固体培养基加琼脂2%；半固体培养基加琼脂0.75% 2、酵母菌常用培养基 （1）麦芽糖培养基 蛋白胨1% 麦芽糖2% 酵母膏0.5% 琼脂2% 自然pH 121.3℃ 3、霉菌常用培养基 PDA（马铃薯蔗糖培养基） 去皮马铃薯200g切成小块，加水1000ml煮沸30min出汁，三层纱布过滤，滤液中加入2%蔗糖，补充水至终体积1000ml，加琼脂2%，自然pH。121.3℃ 四、实验中出现的问题及讨论 1、配制培养基操作过程中的问题。 2、培养基灭菌操作过程中的问题。 3、培养基灭菌后出现的异常现象，分析原因，讨论解决方法。 实验二 酸奶的酿制及乳酸菌的分离 一、实验目的要求 1、学习并掌握酸奶制作的基本原理和方法。 2、学习并掌握从酸奶中分离和纯化乳酸菌的方法。 二、基本原理 酸奶是以牛乳为主要原料，接入一定量乳酸菌，经发酵后制成的一种具有较高营养价值和特殊风味的发酵乳制品饮料。通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，当产酸到一定程度时，乳酸使牛奶中酪蛋白(约占全乳的2．9％，占乳蛋白的85％)变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。同时，通过发酵还可形成酸奶特有的香味和风味(与形成乙醛、丁二酮等有关)，并具有清新爽口的味觉。由于酸奶中含有乳酸菌的菌体及代谢产物，因而对肠道内的致病菌有一定的抑制作用；对人体的肠胃消化道疾病也有良好的治疗效果。 三、器材 1、乳酸菌种：自市售各种酸奶中分离 保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和嗜热链球菌(Strep． tococcus thermophilus) 2、培养基： （1）发酵培养基：市售鲜奶或用奶粉进行配制 （2）分离乳酸菌培养基：（任选一种）培养基→平板→划线 MRS分离培养基 3、优质全脂奶粉（内含脂肪28%，蛋白质27%，乳糖37%，矿物质6%，水分2%），白砂糖，蒸馏水。 4、酸奶发酵瓶，封口膜，保鲜膜，不锈钢锅，铁勺，塑料漏斗，无菌移液管（带棉花），脱脂棉，牙签，培养皿，恒温水浴锅，培养箱，冰箱等、温度计 四、操作步骤 全脂乳粉、砂糖、水 混合均匀 预热(60-70℃) 均质(15-18MPa) 灭菌(85-90℃，5-8min) 冷却(43-45℃) 接种 分装 封口 菌种 活化 母发酵剂 生产发酵剂 保温发酵(42-43℃，3-6h) 酸奶瓶 清洗 开水烫洗消毒