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基因表达系统的研究进展 　　摘要 随着世界分子生物学的研究不断发展，基因表达技术有了很大的提高。到目前为止，人们已经研究出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核生物表达系统主要有大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统等；真核生物表达系统主要包括酵母表达系统、丝状真菌表达系统等。各种表达系统各具优缺点，对其进行了详细介绍。 　　关键词 基因表达；原核表达系统；真核表达系统 　　中图分类号Q786文献标识码A文章编号1007-5739（2008）02-0205-03 　　 　　随着世界分子生物学研究不断深入，基因表达技术有了很大的提高。迄今为止，人们已经研究开发出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。例如，原核生物表达体系中的大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统等，其中大肠杆菌表达系统被广泛应用，真核生物表达系统比较复杂一些，包括酵母表达系统、昆虫表达系统、哺乳动物细胞表达系统等。 　　高荣凯等（1997）认为，现有外源基因表达系统主要包括：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫杆状病毒、动物乳腺生物反应器及植物表达系统等。这些外源基因表达系统在基因表达量、表达产物的分离纯化及活性、成本等方面各有优缺点。 　　克隆基因的表达对研究其所编码蛋白质的结构与功能及其实际应用都是十分重要的。克隆基因可以放在不同的宿主细胞中表达，包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、昆虫细胞、培养的哺乳类动物细胞，以至整体动、植物。能否使目的基因在不同的系统中成功表达，取决于我们对这些系统中基因表达调控机理的认识程度。 　　 　　1原核生物表达系统 　　 　　在各种表达系统中，最早采用的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术主要是将已克隆目的基因片段的载体转化细菌（一般是大肠杆菌），通过诱导表达、纯化获得所需的目的蛋白。 　　由于细菌培养操作简单、生长繁殖快、价格低廉，外源基因表达产物的水平高（如大肠杆菌中目的蛋白的表达量可超过细菌总蛋白量的80%），基因背景和表达特性清楚等因素，使得细菌表达系统成为最受欢迎的异源蛋白表达系统之一。此表达系统中最为常用的是大肠杆菌和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。 　　1.1大肠杆菌表达系统 　　自20世纪70年代以来，大肠杆菌一直是基因工程中应用最为广泛的表达系统。尽管基因工程表达系统已经从大肠杆菌扩大到酵母、昆虫、植物及哺乳动物细胞，并且近年来出现了很多新型的真核表达系统，但是大肠杆菌仍然是基因表达的重要工具。尤其是进入后基因组时代以来，有关蛋白结构以及功能研究的开展，对基因表达的要求更高，这时大肠杆菌往往是表达的第一选择。 　　大肠杆菌具有培养条件简单、生长繁殖快、安全性好、可以高效表达不同外源基因产物等特点，是许多外源基因表达系统中最好的一种，是目前研究最深入、发展也最完善的表达系统，大量的有价值的多肽和蛋白质已在大肠杆菌中获得了超量表达，如花生条纹病毒外壳蛋白基因、木聚糖酶基因、大蒜病毒外壳蛋白基因等都已在大肠杆菌中获得了表达。但不容忽视的是大肠杆菌也并不是万能的宿主，有些蛋白质必须经过翻译后修饰（如糖基化、特定位点的切割）才能具有完全的生物活性，表达这些蛋白质时最好选择真核细胞作为宿主。 　　大肠杆菌表达体系与其他表达体系相比，具有一些缺点：①高效表达易形成包涵体。②不能进行翻译后的加工修饰，如糖基化、磷酸化及酰基化等。外源基因在大肠杆菌中的表达是一个复杂的过程。影响表达效率的因素很多，仅改进1个或2个方面是不能取得明显效果的，必须结合外源蛋白的具体性质及表达载体、宿主菌的特点，选择出合适的表达条件。 　　基因表达过程是一个复杂的过程，涉及基因的转录、翻译、翻译后加工、细胞的代谢以及细胞内基因与蛋白、蛋白与蛋白之间的相互作用。进入后基因时代之后，大肠杆菌首先被选作研究蛋白组学、基因功能、蛋白质网络等新课题的模型，揭示了很多基因表达的未知领域，同时提供了更多发展大肠杆菌表达系统的依据。伴随分子生物学新技术的涌现，大肠杆菌势必在实验研究及工业生产重组蛋白的应用中发挥出更大的作用。随着对大肠杆菌表达系统研究的不断深入，随着更多的表达机理和影响因素的发现，将会有更好的大肠杆菌表达系统被人类加以利用。 　　1.2枯草芽孢杆菌表达系统 　　枯草芽孢杆菌是一类好氧型、内生抗逆孢子的杆状细菌，广泛存在于土壤、湖泊、海洋、动植物的体表，自身没有致病性，只具有单层细胞外膜，能直接将许多蛋白分泌到培养基中。在营养缺乏的条件下，枯草芽孢杆菌停止生长，但同时加快代谢作用，产生多种大分子的水解酶和抗生素，并诱导自身的能动性和趋化性，从而恢复生长。在极端的条件下，还可以诱导产生抗逆性很强的内源孢子。作为革兰氏阳性细菌的典型