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巴豆化学成分及其细胞毒活性的研究お 　　[摘要] 综合运用硅胶、MCI、Sephadex LH20柱色谱和制备薄层色谱、半制备高效液相色谱等方法，对巴豆Croton tiglium化学成分进行分离纯化，并采用波谱学手段鉴定化合物结构。从巴豆中分离并鉴定了7个化合物，分别为： 壬二酸二甘油酯 （1）、12O（α甲基丁酰基）佛波醇13癸酸酯 （2）、12O（α甲基巴豆酰基）佛波醇13癸酸酯 （3）、（9S，10R，11E，13R）9，10，13三羟基十八碳11烯酸 （4）、（9S，10R，11E，13R）9，10，13三羟基十八碳11烯酸甲酯 （5）、4（1H）喹啉酮 （6）、5羟基2羟甲基吡啶 （7）。其中化合物1为新化合物，化合物4～7均为首次从大戟科中分离得到，化合物2和3对人肺癌细胞A549和人肝癌细胞HepG2有明显的细胞毒作用，抑制人肺癌细胞A549增值的IC50分别为47.8，7.0 μmol?L-1，抑制人肝癌细胞HepG2增值的IC50分别为71.4， 44.0 μmol?L-1。 　　[关键词] 巴豆； 化学成分； 结构鉴定； 细胞毒活性 　　巴豆为大戟科植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟种仁，供药用，有大毒。临床多用其去油炮制品，内服峻下冷积、逐水退肿、豁痰利咽，外用蚀疮，可用于恶疮疥癣[1]。巴豆油具有一定的致炎性、刺激性和致癌性[2]、调节小鼠肠道蠕动[3]等作用，现代对巴豆油的药理活性研究较多，但对巴豆中的药效物质基础研究相对较少。巴豆属中目前已报道的化合物主要为二萜类、黄酮类、生物碱、苯丙素和木脂素、羧酸及其酯类，也含有少量的三萜和甾体类成分[46]。为进一步阐述巴豆的药效物质基础，本文对巴豆进行了成分分离和细胞毒性实验，成功从巴豆中分离得到了7个化合物，分别为壬二酸二甘油酯 （1）、12O（α甲基丁酰基）佛波醇13癸酸酯 （2）、12O（α甲基巴豆酰基）佛波醇13癸酸酯（3）、（9S，10R，11E，13R）9，10，13三羟基十八碳11烯酸 （4）、（9S，10R，11E，13R）9，10，13三羟基十八碳11烯酸甲酯 （5）、4（1H）喹啉酮 （6）、5羟基2羟甲基吡啶 （7）。其中化合物1为新化合物，化合物4～7为首次从大戟科中分离得到；化合物2和3对人肺癌细胞A549和人肝癌细胞HepG2有明显的细胞毒作用。 　　1 材料 　　Bruker600、Bruker500核磁共振波谱仪；Waters Synapt G2高分辨质谱仪；Agilent 1220型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）。葡聚糖凝胶Sephadex LH20（瑞典Amershan Pharmacia公司）；柱色谱硅胶（200～300目）、柱色谱硅胶H和薄层色谱硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；MCI 柱色谱CHP 20P（75～150 μm） 为日本Mitsubishi Chemical 公司生产；GF254硅胶制备薄层板（烟台江友硅胶开发有限公司）；色谱甲醇（Sigma 公司）。酶标仪（Thermo 3001）为Thermo Fisher Scientific 公司生产；显微镜（Primo Vert，AxioCam ERc 5s）为ZEISS 公司生产；超净台MCVB161F（T）为日本SANYO 公司生产。DMEM、RPMI1640培养基、胎牛血清均为Hyclone 公司生产；MTT 为美国Amresco 公司生产；胰蛋白酶由美国Gibco 公司生产；紫杉醇购于中国食品药品检定研究院（批号：100382201102，纯度99.6%）。本论文未特别指出纯度的试剂均为分析纯。人肺癌细胞株A549和人肝癌细胞株HepG2均来源于美国ATCC公司。 　　巴豆购于成都荷花池中药材专业市场，由成都中医药大学药用植物教研室龙飞教授鉴定为巴豆C. tiglium的干燥种仁。 　　2 提取与分离 　　巴豆药材5 kg，粉碎，用石油醚进行脱脂处理，8倍量溶剂，回流3次，48 ℃减压浓缩得到石油醚部位685 g；脱脂后的药材，用90%乙醇回流提取3次，每次2.5 h，55 ℃减压浓缩得浸膏，将所得的浸膏加热水混悬，用乙酸乙酯萃取得粗提物375 g。将石油醚部位经硅胶柱色谱，用石油醚乙酸乙酯系统梯度洗脱，得到11个组分（Fr.1～Fr.11），Fr.6再经硅胶、Sephadex LH20凝胶、正相半制备高效液相色谱反复分离纯化得化合物2（7 mg）和3（5 mg）；乙酸乙酯部位经硅胶色谱，用二氯甲烷甲醇系统梯度洗脱，得15个组分（Fr.1～Fr.15），Fr.8经MCI树脂，用甲醇水系统（60∶40～100∶0）梯度洗脱，得14个流分（Fr.81～Fr.814），Fr.82经Sephadex LH20、制备薄层色