脱氢酶参与的连续监测法.PDF

· · 第二十四章 连续监测法测定酶活性浓度 　 424 第二节 脱氢酶参与的连续监测法 　 () , () 利用 在 处有特异吸收峰 而 只在 处有明显的吸收 NAD PH 340nm NAD P 260nm , () , 峰 检测 340nm吸光度变化速率反映了 NAD PH的生成或消耗速率 从而可直接测定氧 。 , 。 : 化还原酶 也可利用酶偶联反应 间接测定以氧化还原酶做指示反应的酶活性 问题是 , , 由于 或 不稳定 在含有 或 的试剂中 由于配制或保存的原 ① NADPH NADH NADPH NADH , , , 因使它们会被氧化 吸光度降低 因此在使用时要求初始吸光度不能低于0.9以保证有足够浓度的 或 。 内源性 或 和脱氢酶可对测定带来干扰。 NADPH NADH ② NADPH NADH 、 一 丙氨酸氨基转移酶 ( ) 一 测定方法概述 测定丙氨酸氨基转移酶( , )的方法可根据测定产物的不同分 alanineaminotransferaseALT 。 , 为测定谷氨酸和测定丙酮酸两类 测定谷氨酸以酶电极法作代表 因需特殊仪器不适合临床检 。 : , , 验 测定丙酮酸的方法又可以分为三类 以赖氏法为代表的定时法 因该显色反应特异性差 ① , , , 酮戊二酸干扰大 在试剂配方中 二硝基苯肼和 酮戊二酸的用量严重不足 造成准确 α 24 α 度和精密度较差; 以 推荐法为代表的连续监测法; , ② IFCC ③偶联丙酮酸氧化酶法 利用丙酮酸 , ,, 三溴 羟苯甲酸和氨基安替比林在过氧 氧化酶氧化丙酮酸生成过氧化氢 过氧化氢与 246 3 。 , 、 化物酶的作用下生成红色化合物 该方法呈色反应特异性差 容易受到溶血 黄疸和血清中氧化 , , , 。 , 还原物质的干扰 但检测的灵敏度高 可使用 孔板分析 在血站的筛查中广泛使用 目前 国