肠道菌群移位在小鼠急性心肌梗死后单核细胞亚群表型调节中的作用及意义-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的：肠道菌群移位（intestinal microbial translocation）常出现于严重烧伤、晚 期肝硬化（cirrhosis）以及重症胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）等危重疾 病中,被认为是全身炎症反应综合征发生发展的中心环节。肠道细菌崩解产物内 毒素的主要成分—脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）入血能够激活机体的免疫 细胞如单核细胞、中性粒细胞等，进而引发全身性炎症反应。急性心肌梗死（acute myocardial infarction, AMI）是心血管内科中最危重的紧急事件，为冠状动脉急 性狭窄或闭塞导致供血突然减少或中断，心肌细胞发生严重的缺血性坏死，作 为心内科最常见的疾病，发病急骤、病死率极高。慢性心力衰竭是急性心肌梗 死存活之后的主要结局。大量研究显示单核细胞亚群（国际上根据细胞表面标 志物的差异将单核细胞划分为经典型、中间型、非经典型三个亚群）在急性心 肌梗死后病理生理进程中发挥着极为关键的作用，其中 Ly6Chi 单核细胞主导早 期梗死区域坏死物质的吞噬和酶解，促进炎症反应，Ly6Clo 单核细胞主导后期 血管再生和胶原修复，促进炎症的消退。近期研究显示 Ly6Chi 单核细胞比例升 高与心肌梗死后炎症反应过度、组织修复延迟以及梗死后心室重塑密切相关， 提示抑制 Ly6Chi 中介的炎症反应是梗死后心室重塑的一个潜在治疗靶点。本研 究旨在检测小鼠急性心肌梗死后肠道通透性的改变以及外周血 LPS 的变化，并 通过观察 LPS 清除剂多粘菌素 B（polymycin B, PMB）对心肌梗死后单核细胞 亚群表型调节以及梗死后炎症反应和胶原修复的影响，初步讨论肠道菌群移位 在小鼠急性心肌梗死后单核细胞亚群表型调节中的作用及意义，为急性心肌梗 死后心室重塑的防治探索新的思路。 方法：1) 6 周龄、雄性、C57BL/6J 小鼠经喂养适应环境 7 天后，随机分组为正 常不加干预组（Normal 组）、心肌梗死组（MI 组）、假手术组（Sham 组）。Normal 组为正常小鼠，不加干预，MI 组为开胸后结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌 梗死模型，Sham 组为开胸后只穿线不结扎血管。3d 后各组小鼠经肠道给予 FITC-dextran-4KD（FD4），剂量为 0.4mg/g，3h 后行下颌静脉丛取血，利用荧 光分光光度计检测外周血中 FD4 的荧光强度并进行定量，评估肠道通透性的变 化。2) 6 周龄、雄性、C57BL/6J 小鼠经喂养适应环境 7d 后，随机分为心肌梗 死组（MI 组）、假手术组（Sham 组）、心肌梗死+生理盐水组（MI+ NS 组）以 及心肌梗死+多粘菌素组（MI+PMB 组），MI+PMB 组小鼠使用 1mL 注射器经 I 腹腔注射给予 PMB 溶液（2.5μg/g），MI+ NS 组给予等体积生理盐水。每组共 25 只小鼠，分为 1d，3d，5d，7d，14d 5 个时间点，每个时间点 5 只小鼠。MI+PMB 组与 MI+ NS 组小鼠于手术即刻以及 1d、2d、3d 分别使用 1mL 注射器经腹腔 注射给予 PMB 与等体积生理盐水，于造模后 1d，3d，5d，7d，14d 取材，运用 流 式 细 胞 术 检 测 各 时 间 点 外 周 血 单 核 细 胞 亚 群 （ Ly6ChiCD11b+Ly6G- 以及 Ly6CloCD11b+Ly6G-）的比例，鲎试剂终点显色法检测外周血中 LPS 的浓度， 3d 心脏组织石蜡包埋后行苏木素-伊红（hematoxylin and eosin, HE）染色结合 炎症评分评估心肌梗死后炎症反应，7d 心脏组织行 2，3，5—氯化三苯基四氮 唑（2，3