多囊卵巢综合征胰岛素抵抗相关基因的实验研究-妇产科学专业论文.docx

DOCTORA 1iε GRADUATION THESIS HUST 多囊卵巢综合征膜岛素抵抗相关基因的实验研究* 华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科 博士研究生 李曼 博士导师 孙永玉教授 中文摘要 目的z 多囊卵巢综合征 (Polycystic Ovary Syndrome. PCOS) 是以 膜岛素抵抗 (Insulin Resistance，IR) 为特征的内分泌代谢性疾病。 其族岛贮备功能及葡萄糖耐量正常提供了与 NIDDM 、肥胖患者不同的选 传学基础。 IR 不仅是 II型糖尿病的主要病理基础，而且已被证实为许多 其它人类疾病的主要特征。尽管近年来对 IR 发生的机理研究已取得了许 多突破性的进展苦但由于其涉及面广以及相关的信号转导系统的复杂性， 囚的确切分子机理仍不十分清楚。本研究着眼于 PCOS 的代谢障碍，基 于已有的研究成果，从基因结构上寻找可能的突变位点:从基因功能调 节方面进一步探讨 PCOS IR 发生的确切机理，以期为 PCOS 患者治疗开辟 新的途径，为其严重代谢并发症的防治提供理论依据。 方法: (一〉选取 PCOS 患者作为研究组，无内分泌障碍的正常育龄 期妇女为对照组，运用葡萄糖氧化酶法和放射免疫法 (RIA) 分别测定两 级的空腹血糖、空腹血清女性内分泌激素及交腹膜岛索水平:结合临床 特征啻采用稳态模型 (HOMA Model) 膜岛素抵抗指数 (Insulin Resistance Index ，IRI) 对上述研究对象的 fR 状态进行分析。同时对 PCOS IR 与肥 胖、高雄激素的相互关系进行探讨。(二〉应用聚合酶链反应-单链构 ‘本课题受国家自然科学基金项目资助〈编号; DOcrORATEGRADUATIONTHESlSHUST DOcrORATE GRADUATION THESlS HUST 象多态性 CPCR-single strand conformation polymorphism，PCR-SSCP) 银染技术结合 DNA 直接测序，检测 31 伊IJ PCOS 患者·及 30 例正常育龄期单 纯子宫肌瘤患者的腹壁脂肪组织中膜岛素受体 (INSR) 基因 17-22 外显 子的 DNA 序列。(三〉采用 Western Blot 方法，检测脂肪组织中 INSR 蛋白的表达，分析其与 INSR 基因 17 外显子多态性的关系。(四〉一步 法抽提 PCOS 患者和单纯子宫肌瘤患者腹部脂肪组织的总 RNA ，应用T7 RNA 聚合酶体外转录技术线性扩增获取足量的 aRNA; 将等量的实验组与 对照组脂肪组织 aRNA 分别逆转录，合成荧光分子掺入的 cDNA 做探针， 混合后杂交 4096 点 BiostarH-40s 芯片，每对样本重复两次实验。经严 格洗片后用 ScanArray 4000 扫描仪扫描芯片获得荧光信号图象，计算机 分析后比较两组脂肪组织中差异表达的基因。 结果: (一)(1) 正常体重 PCOS 组的空腹血清膜岛素 CFINS) 、黄体 剌激素 (LH)、血清翠酣(T) 水平及膜岛素抵抗指数 (HOMA 假)均显著 高于正常体重对照组(只0.01); (2) 超重/肥胖 PCOS 组的 FINS 水平和 HOMA 值显著高于正常体重 PCOS 组(只O. 01); (3)LH 水平和体重指数 CBMI) 与 HOMA 值显著相关，但前两者与 HOMA 不存在交互影响〈户0.989 ， 乒0.953以 IR 在 PCOS 患者中的暴露率显著高于对照组 COR=9.021， P=O.025)Q (二)发现 22 例 INSR 基因 17 外显子的异常电泳条带，突 变经测序分析，为 CAC明→CAT1峭 的纯合多态性突变。外显子 18-22 未检 测到任何有意义突变。 PCOS 组与育龄期单纯子宫肌瘤患者对照组相比较， 17 外显子突变检出率明显增高而膜岛素敏感性显著降低。( 三 ) INSR 基因 17 外显子 1058 位密码子 T 等位基因携带者 INSR 蛋白表达量低于 C 等位基因携带者。(囚〉在 4096 种基因中， PCOS 患者与单纯子宫肌瘤 患者的腹壁脂肪组织间存 在差异表达的基因。所检测的 2 例l临床标本中 共有差异表达基因达 810 条(19. 8%) ，其中402 条基因表达为上调 (9. 8%) ， 2 DOCTORATEGRADUAη DOCTORATE GRADUAηON THESlS HUST 408 条基因表达为下调 (9.96%) 。经生物信息学分析发现在PCOS 的发生 发展中有多类基因参与，如与细胞的结构、细胞基本