多形性胶质母细胞瘤细胞高亲和力高特异性核酸适配体的筛选-外科学(神外)专业论文.docxVIP

目录 缩略词表 4 中文摘要5 英文摘要 6 前 言 7 第一章 多形性胶质母细胞瘤核酸适体的筛选8 1.1 引言 9 1.2 实验材料10 1.3 实验方法11 1.3.1 U118-MG 细胞和 SVGp12 细胞的培养11 1.3.2 U118-MG 细胞核酸适配体的筛选12 1.3.3 克隆与测序13 1.3.4 带荧光标记 DNA 链的合成13 1.3.5 流式细胞分析法13 1.4 结果14 1.4.1 U118-MG 细胞核酸适配体的筛选14 1.4.2 克隆与测序15 1.4.3 流式细胞分析法16 1.5 讨论17 第二章 核酸适配体 GBM128 和 GBM131 生物性能的表征18 2.1 引言18 2.2 实验材料18 2.3 实验方法19 2.3.1 细胞培养19 2.3.2 带荧光标记核酸适体的合成19 2.3.3 流式细胞分析法20 2.3.4 激光共聚焦显微镜分析法20 2.3.5 适配体对临床组织标本的结合能力检测20 2.4 结果21 2.4.1 流式细胞分析法21 2.4.2 激光共聚焦显微镜分析法23 2.4.3 适配体对临床肿瘤标本的检测24 2.5 讨论25 第三章 结论与展望26 参考文献27 致 谢 29 综 述 核酸适配体及其在生物医学领域中的应用30 英文缩略词表 SELEX Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment  配体的指数富集系统进 化 GBM Glioblastoma multiforme 多形性胶质母细胞瘤 TN-C tenascin-C 肌腱蛋白-C ATCC American Type Culture Collection  美国模式培养物保藏库 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应 ssDNA Single strand DNA 单链 DNA PBS Phosphate Buffer Solution 磷酸盐缓冲液 BSA Albumin from Bovine Serum 牛血清白蛋白 Kd dissociation constant 解离常数 FFPE Formalin-Fixed and Parrffin- Embedded  石蜡切片 多形性胶质母细胞瘤细胞高亲和力高特异性核酸适 配体的筛选 硕士研究生：王江杰 指导老师：康德智 教授 杨朝勇 教授 摘要 目的：利用 Cell-SELEX 技术，体外筛选得到可以特异性识别人多形性胶质母细 胞瘤细胞的核酸适配体。 方法：利用化学方法人工合成长度为 84 个碱基的随机寡核苷酸库，以人工培养 的人多形性胶质母细胞瘤细胞系 U118-MG 细胞为靶细胞，以人正常神经胶 质细胞系 SVGp12 细胞为反筛细胞，利用 Cell-SELEX 技术，筛选得到可以 特异性结合 U118-MG 细胞的核酸适配体，并利用流式细胞术以及激光共聚 焦显微镜等技术对所得适配体的生物性能进行表征。 结果：1、经过 30 轮的筛选得到了两条名为 GBM128 和 GBM131 的核酸适体。这两 条适体可特异性地与 U118-MG 细胞结合。 2、两条适体在复杂体系中仍能很好的与靶细胞结合，而且其靶标是位于 靶细胞表面的某种蛋白质成分。 3、两条适配体可以很好地与人脑胶质瘤组织结合，而不与正常的人脑胶 质组织相结合。 结论：筛选得到的核酸适配体 GBM128 和 GBM131 可以特异性的结合于靶细胞表面 的靶标蛋白分子，为适配体在寻找胶质瘤的生物标志物，以及胶质瘤的分 子成像、靶向载药、术中导航等研究领域的应用奠定了基础。 关键词：多形性胶质母细胞瘤,核酸适体,配体的指数富集系统进化 Selection of DNA Aptamers against Glioblastoma Multiforme Cells with High Affinity and Specificity Master Candidate: Jiang-jie Wang Supercisors: Prof. Dezhi Kang Prof. Chaoyong Yang Abstract Objective: To select aptamers that can be able to specifically bind to human glioblastoma multiforme cells by using cell-based Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment (cell-SELEX). Methods: Initial DNA libra