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氯苄基砜衍生物含量测定的方法学的研究 　　摘 要 目的 建立氯苄基砜衍生物（CBS）含量测定高效液相色谱法，并进行方法学研究，验证方法的可靠性及科学性；方法 色谱柱为Phenomenex LUNA C18 250×4.6mm 5μm；流动相为乙腈- 0.1%三氟乙酸（45：55，V/V）；流速1.0 mL.min-1；检测波长279 nm；柱温40 ℃；进样体积20 μL；结果 精密度RSD为0.6%，线性范围为10 μg·mL-1～100 μg·mL-1 （r2=0.9990），CBS平均含量为100.91%（n=6），有关物质与主峰分离良好。结论 该方法简便、灵敏、准确，可用于CBS的质量控制。 　　关键词 氯苄基砜衍生物 方法学研究 高效液相色谱法 　　辐射对正常人体细胞的损伤早在1896年就为公众所知，其对细胞和组织的作用是一个复杂的现象。近年来受各种因素影响，人们受辐射几率有所提高[1]，在一些特殊诊断、治疗过程中，不可避免地会受到不同程度的辐射[2]。氯苄基砜衍生物（CBS）为一种新型的具有DNA修复功能的化合物[3]。其已被证明，在受到辐射照射时可发挥保护作用[4]。然而，目前没有高效液相色谱法[5]可用于分析此化合物。本文旨在建立和验证，CBS的高效液相色谱分析；采用液相色谱分析在酸性，碱性及氧化条件下CBS的降解产物[6]；应用此方法，评估CBS固态药物稳定性，研究其质量控制方法。 　　1 仪器与试药 　　Waters Alliance 2996/2695高效液相色谱仪（美国）；BP211D型电子天平（德国SARTORIUS）；UV2510紫外可见分光光度计（日本岛津）。CBS对照品（批纯度99.96%）CBS供试品（自制，批号20110929均由军事医学科学院放射与辐射医学研究所提供。乙腈（色谱纯）购自山东禹王实业有限公司；三氟乙酸（色谱纯），水为纯化水（哇哈哈有限公司），其他试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件与系统适用性试验 　　色谱柱：Phenomenex C18 （250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%三氟乙酸（45：55，V/V）；检测波长：279 nm；流速：1.0 ml/min；进样体积：20 ?L；柱温：40 ℃。在该色谱条件下，理论板数按CBS峰计算不低于10000，分离度大于1.5，色谱图见图1。 　　图1 CBS色谱图（保留时间在11.9min，杂质峰21.3min） 　　2.2 溶液配制 　　2.2.1 对照品溶液配制 精密称取对照品10 mg于100 mL量瓶中，加不加酸流动相（乙腈：水=45：55）溶解并制成每1 mL约含CBS0.1 mg的溶液，作为对照品贮备液。 　　2.2.2 供试品溶液配制 精密称取样品10 mg，加不加酸流动相（乙腈：水=45：55）溶解并制成每1 mL约含CBS0.05 mg的溶液，作为供试品溶液备用。 　　2.3 专属性考察 　　2.3.1 酸降解物 取CBS样品配制得1 mg/mL贮备液。精密量取贮备液1 mL于10 mL量瓶中，加1.0 mol.L-1盐酸3 mL，80 ℃水浴加热5.5小时，加1.0 mol.L-1氢氧化钠3 mL调至中性，加不加酸流动相（乙腈：水=45：55）定容至刻度，进样20 ?L，记录色谱图2（a）。 　　2.3.2 碱降解物 取CBS样品配制得1 mg.mL-1贮备液。精密量取贮备液1 mL于10 ml量瓶中，加1.0 mol.L-1氢氧化钠3 mL，80℃水浴加热5.5小时，加1.0 mol.L-1盐酸3 mL调至中性，加不加酸流动相（乙腈：水=45：55）定容至刻度，进样20 ?L，记录色谱图2（b）。 　　2.3.3 氧化产物 取CBS样品配制得1 mg.mL-1贮备液。精密量取贮备液1 mL于10 mL量瓶中，加30%双氧水3 mL，80℃水浴加热5.5小时，加不加酸流动相（乙腈：水=45：55）定容至刻度，进样20 ?L，记录色谱图2（c）。 　　2.3.4 光降解物 取CBS样品在4500 xl光照条件下放置10天后，加不加酸流动相（乙腈：水=45：55）配制得100 μg.mL-1溶液，进样20 ?L，记录色谱图2（d）。 　　2.4 线性范围的考察 　　分别精密量取“2.2项下”对照品贮备液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、8.0 mL，置10 mL量瓶，加不加酸流动相（乙腈：水=45：55）稀释至刻度，分别配制成10、20、40、50、60、80 μg.mL-1的梯度对照品溶液，取上述溶液及贮备液20 μL，在“2.1”色谱条件项下