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秋水仙素诱导厚皮甜瓜倍性的研究 　　摘要：为了成功获得厚皮甜瓜四倍体，研究其倍性特征，本试验用二倍体厚皮甜瓜M01―3为试材，用O.1％、O.3％、0.5％和O.7％的秋水仙素溶液通过涂抹法对子叶期和一叶一心期幼苗进行处理，并通过染色体计数法和细胞学鉴定法分析倍性。结果表明，已获得同源四倍体甜瓜，0.3％和O.5％的诱导率最高；与二倍体相比，四倍体植株长势好，叶形指数小，茎增粗，花冠大，花色艳，果肉变厚，可溶性固形物含量增加，气孔变大，叶绿体数目增多。 　　关键词：厚皮甜瓜；秋水仙素；诱变；四倍体 　　中图分类号：S652.036 文献标识号：A 文章编号：1001―4942(2010)08―001l―04 　　 　　甜瓜(Cucumis melo L)果实香甜，营养丰富，外观美丽，香气浓郁，性寒止渴，是深得世界各地人们喜爱的园艺作物之一。甜瓜属于葫芦科(ClieUrbitaeeae)黄瓜属(cucumis)的一个亚属(甜瓜亚属Subgen melo)，按生态学特性分为厚皮甜瓜与薄皮甜瓜两种，都属二倍体物种，其体细胞染色体数目为2n=24。 　　园艺作物多倍体在育种中具有重要的地位和应用价值。由于染色体组倍性增加，在许多性状上发生深刻变化，如细胞体积增大，器官肥大，茎粗叶厚，叶色绿，花果硕大，气孔大，抗性强。但自然突变率低，通常通过人工诱导创造植物多倍体类型。Lotfi等对甜瓜单倍体进行研究，成功获得双单倍体；何欢乐、马国斌等对甜瓜进行离体诱导获得四倍体；吴明珠等对甜瓜进行辐射诱变获得多个多倍体甜瓜材料；王双武等用秋水仙碱进行了离体诱导薄皮甜瓜四倍体的研究。 　　本试验用化学试剂秋水仙素诱导二倍体厚皮甜瓜，其主要作用机理是抑制了细胞分裂时纺锤体的形成，使复制后的染色体不能拉向两极，细胞不能继续分裂形成两个子细胞，从而导致染色体加倍形成多倍体细胞，通过研究其形态学、细胞学与染色体数目的变化，从中选择具有优良性状的材料，或直接选育优良新品种，作为进一步选育三倍体甜瓜的原始材料，为厚皮甜瓜育种提供丰富的种质资源，为甜瓜多倍体诱导技术研究提供技术支持。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1试验材料 　　试验于2008年3―6月在山东农业大学园艺实验站日光温室进行。供试材料为M01―3自交系品种，黄皮白肉，椭圆形，含糖量中等，肉质酥脆多汁，口感风味特佳。 　　1.2试验方法 　　1.2.1诱变方法本试验共处理800棵幼苗，分两批，使用浓度为O.1％、O.3％、0.5％和O.7％的秋水仙索溶液，分别于子叶期和一叶一心期通过涂抹法对甜瓜幼苗生长点进行诱变处理，时间为上午7：oo和下午16：00，连续处理3天，对照用清水处理。 　　1.2.2鉴定方法用形态学鉴定法和染色体记数法初步鉴定多倍体材料。通过对植株生长发育期外部形态特征观察，如茎粗、叶片长、叶色、叶形指数、花果变化等，初步判定植株倍性。并用卷须染色体压片法观察染色体数目变化，鉴定并选取多倍体材料并留种。 　　1.2.3四倍体植株生长势指标测定(1)经染色体计数法鉴定的自交种第二年春天种植，随机取10株，测各植株的高度，并选取相同节位测定茎粗、叶长和叶宽，计算叶面积。(2)随机取3个自交果实，分别测其果实横径纵径、果肉厚度，种腔横纵径和单瓜种子数。 　　1.2.4四倍体植株品质指标测定 　　(1)可溶性固形物含量测定：果实成熟后，每处理随机采摘10个果实，用手持测糖仪(WYT型)测定果实可溶性固形物含量。 　　(2)可溶性糖含量测定：称取0.3 g新鲜果实样品于试管中，加入10 ml蒸馏水，沸水浴30min，然后过滤入50 ml容量瓶中，冲洗残渣，定容，吸取1 ml提取液(对照加2 ml蒸馏水)于试管中，加蒽酮乙酸乙酯液(1 g蒽酮+50 ml乙酸乙酯)0.5 ml，浓硫酸5 ml，振荡，沸水浴l min，自然冷却，630 am下比色。制作标准曲线，计算含量。 　　(3)vc含量测定：称取4.0 g新鲜样品，置入研钵中，加2％草酸5 ml，研成匀浆。通过漏斗将样品提取液转移到50 ml容量瓶中。残渣再用2％草酸提取2―3次，提取液及残渣一并转入量瓶。2％草酸总量为35 ml，最后以水定容。摇匀，过滤，滤液备用。吸取滤液10 ml，放人50 ml三角瓶中，立即用2，6一二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的粉红色在15 s内不消失为止。记录所用滴定液体积。根据公式计算含量。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1秋水仙素诱变处理结果 　　秋水仙素作为化学诱变剂，具毒性，处理后植株有死亡。由表1可看出：在处理时期上，秋水仙素溶液在甜瓜幼苗子叶期处理时，其死亡株数多于一叶一心期；从秋水仙素溶液浓度上分析，在一定浓度范围内，溶液浓度越高，