教育论文hpl法测定肿节风提取物中反丁烯二酸的方法及优化2.docVIP

HPLC法测定肿节风提取物中反丁烯二酸的方法及优化$ 目的探索及优化HPLC法测定肿节风提取物中反丁烯二酸的 方法。方法采用单因素试验分别对HPLC法测定肿节风提取物中反丁 烯二酸的流动相比例、流动相PH值、流速、柱温进行优化，每个因 素设定4个水平，以找出每个因素的最适宜水平。结果在乙腈-磷酸 V:V=15:85,鱗酸PH二3、流速为1ml/min，柱温28°C条件下,对对照 品与供试品进行色谱分离结果较满意。结论经单因素实验优化实验 条件可以用于测定肿节风中反丁烯二酸含量。 关键词：肿节风反丁烯二酸高效液相色谱法单因素试验 肿节风为近年研究较多的中草药，又名草珊瑚、九节茶、接骨金 粟兰等，为金粟兰科植物草珊瑚Sarrandra gLabra (Th u nb.) Nakai 的干燥全草。肿节风味苦，辛，性平，具有清热凉血，活血消斑，祛 风通络的功效m。现代医学研究表明肿节风的化学成分主要有：有机 酸、黄酮、倍半萜、挥发油、香豆素等多种化学成分，具有抗菌消炎、 抗肿瘤、抗病毒等多种活性^1。本实验通过高效液相色谱法测定肿 节风药材中反丁烯二酸的含量，以期获得一个专属性高、准确性好、 简便的测定方法，为进一步研究肿节风中的有效成分提供依据。 1仪器与试药 高效液相色谱仪：戴安M-3000高效液相色谱仪，紫外可变检测 器(M3000)，变色龙 6. 8 工作站、色谱柱:AccLaimC18(250nmX4. 6nm, 5um)、电子分析天平、水浴锅、超纯水仪、负压过滤器、超声波清 洗器、中药粉碎机。对照品反丁烯二酸（批号：111541-201102，中 国食品药品检定研究院）、肿节风药材（购于百色市生物医药有限公 司，产地：玉林）经本院张树球教授鉴定为肿节风药材。磷酸为分析 纯、乙腈为色谱纯，超纯水。 2方法与结果 2.1对照品和供试品的制备精密称取反丁烯二酸对照品8mg，置于 100ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45Pin有机微 孔滤膜过滤即可。 精密称定肿节风药材茎粉末l.Og，置100ml锥形瓶中，加入约50ml 甲醇，于70°C水浴回流提取lh，将提取液于60°C水浴挥干，残渣用 乙腈（原液与乙腈体积比为4:1）超声lOmin溶解，0.45um有机滤 膜过滤，即为供试品。 2.2对照品检测波长的选择取对照品溶液，在流动相为乙腈-0.1% 磷酸溶液（20:80），流速lml/min,柱温30°C、进样量为20 ul的条 件下，进行3D紫外扫描，反丁烯二酸在220nm有最大吸收峰，选择 220nm作为检测波长。 2.3单因素试验以流动相的配比、流动相PH值、流速、柱温作为影 响色谱分离效果的单因素，分别对反丁烯二酸标准品进行色谱分离， 以找出不同因素的适宜范 2.3.1流动相的配比对色谱分离的影响在柱温为28°C、检测波长 为220醐、流动相磷酸PH2.9、流速为lml/min,进样量为20 u 1的 条件下，以乙腈：磷酸体积比分别为：V:V=25:75、20:80、15:85、 13:87条件下，分别进样色谱分离。结果以乙腈-磷酸V:V=15:85色 谱分离效果较佳。 2.3.2流动相PH值对色谱分离的影响在柱温为28°C、检测波长为 220nm、乙腈-磷酸V: V=15: 85、流速为lml/min,进样量为20ul的 条件下，以磷酸PH 2. 9、3、3.5、4条件下，分别进样色谱分离。结 果以磷酸PH=3色谱分离效果较佳。 2.3.3流速对色谱分离的影响在柱温为28°C、检测波长为220nm、 乙腈-磷酸V:V=15:85、磷酸PH=3，进样量为20 的条件下，以流 速为0.8、0.9、1、1. 5ml/min条件下，分别进样色谱分离。结果以 流速为lml/min色谱分离效果较佳。 2.3.4柱温对色谱分离的影响在检测波长为220nm.乙腈-磷酸 V：V=15：85,磷酸PH=3、流速为lml/min,进样量为20 u 1的条件下， 以柱温为26、28、30、35°C条件下，分别进样色谱分离。结果以柱 温28°C色谱分离效果较佳。 2.4对照品及样品测定结果在检测波长为220nm、乙腈-磷酸 V：V=15：85,磷酸PH=3、流速为lml/min,柱温28°C,进样量为20 u 1 的条件下，分别进样色谱分离，结果见下图1. 2C13C421f?Vl；?1 2C13C421f?Vl；?143 UV VIS 1 mAU 4-3.477 I VAl?20rvn 1^5(^ 750- 500 L-?:: 7K37 . ? -U007 ?200- 00 25 50 7.5 100 U5 150 175 200 1反丁烯二酸对照品 1反丁烯二酸对照品HPLC图 2样品HPLC图 图1反丁烯二酸对照品及肿