贵州黄壤地区葛藤根际溶磷细菌溶磷分泌IAA及其它特性的研究.docVIP

贵州黄壤地区葛藤根际溶磷细菌溶磷分泌IAA及其它特性的研究 　　摘要： 从葛藤（Pueraria lobata）根际分离出8株具有较强溶解无机磷能力的菌株，溶磷圈法测定菌株的HD/CD值（溶磷圈直径HD，菌落直径CD）在2.14～6.73，液体振荡培养下菌株对磷酸钙的溶解量在72.28～159.15 mg/L，菌株培养液pH值较初始培养基的pH值7.0均下降。菌株GTR2和GTR15溶解磷酸钙（分别为159.15 mg/L、138.72 mg/L）及分泌IAA能力（分别为12.71 mg/L、14.44 mg/L）均较大，且均为碱性菌株，能在甘露醇等多种碳源上较好生长。综合各菌株的溶磷及分泌IAA能力，菌株GTR2和GTR15有望成为高效微生物磷肥接种剂的优良菌种。 　　关键词： 葛藤溶磷细菌；溶磷；分泌IAA； 　　中图分类号： Q 939.9文献标识码： A文章编号： 1009?5500(2012)01?0018?06 　　 　　近年来，如何有效解决我国土壤普遍缺磷，提高土壤磷的循环利用效率成为磷研究方面的热点。利用微生物提高土壤中难溶性磷的生物有效性，对于促进作物增产和环境保护具有重要意义\[1-4\]，其中植物根际磷细菌与土壤中无机磷的转化、贮藏及供应关系密切，在改善土壤供磷性能和结构方面作用显著\[5\]。因此，新型溶磷微生物肥料的开发利用潜力巨大。 　　葛藤（Pueraria lobata）为多年生草质藤本植物，适应性强、耐寒、抗旱，其根、茎、叶、花等都含有丰富的营养，根瘤发达，固氮多，是发展现代农牧业的理想植物。葛藤的茎、枝、叶含有粗蛋白质20.89％～29.20％、粗脂肪2.45％～4.20％、粗纤维26.55％～34.189％、灰分5.91％～9.97％、钙2.11％、磷0.09％和无氮浸出物30.39％～40.70％；同时茎、枝、叶中干物质含量为鲜草重量的22.30％，其中总能量17.53～18.62 MJ/kg、消化能11.51 MJ/kg、可消化粗蛋白质209 g/kg\[6\]。目前，葛藤的药用、饲用及生态等方面的开发利用价值正在提升，获得了巨大的经济效益、社会效益和生态效益\[7\]。近年来，溶磷细菌的研究多集中在部分牧草、农作物及土壤中\[8-10\]，对于藤本类饲料植物研究报道较少。此次对生长于贵州黄壤地区的葛藤根际溶磷菌进行分离，并根据不同菌株的溶磷强度、分泌IAA能力、产酸产碱性能及碳源利用特性筛选优良菌种，为开发利用葛藤根际溶磷微生物资源，提高喀斯特地区黄壤中磷素的循环利用率提供基础材料，同时为葛藤的绿色无公害生产提供磷素营养奠定基础。 　　1材料和方法 　　1.1样品采集 　　以5点法采集生长于贵州南部黄壤中（贵州省草业研究所试验地）的葛藤根系及根际土壤样品5份，每份样品重0.5～1.0 kg，采样时间为2010年10月；采样地土壤pH 5.97，有机质1.695%，全氮0.218%，水解氮156.98 mg/kg，有效磷15.02 mg/kg，速效钾为10.20 mg/kg。 　　1.2溶磷细菌筛选 　　1.2.1培养基分离溶磷菌培养基（PKO）\[11\]：葡萄糖10.0 g、NaCl 0.2 g、（NH4）2SO40.5 g、MgSO4?7H2O 0.1 g、KCl 0.2 g、MnSO40.03 g、FeSO4?7H2O 0.003 g、酵母粉0.5 g、琼脂15.0～20.0 g、加蒸馏水至1 000 mL、pH 6.8～7.2，含磷酸钙3.0 g，有改进。保存用LB培养基。 　　1.2.2溶磷圈法筛选溶磷细菌按常规分离细菌法\[12\]涂布样品悬液于含难溶性磷酸钙的PKO无机磷固体培养基平板上，28 ℃倒置于恒温培养箱中培养至有类似溶磷菌的分离物后，挑取分离物进行纯化，再点接种于含难溶性磷酸钙的PKO固体培养基上进行溶磷菌株筛选\[13\]。 　　1.3溶磷强度测定 　　采用钼锑抗比色法测定有效磷含量。接种0.5 mL活化菌株菌悬液装入50 mL灭菌的无机磷培养基，28 ℃、150 r/min恒温摇床上振荡培养7 d。然后取培养液在10 000 r/min转速下离心10 min，取适量上清液测磷含量，菌株溶磷量为培养液磷含量减去对照磷含量（以P mg/L表示），酸度计测定培养液pH值。每菌株重复3次，对照不接菌。 　　1.4溶磷细菌分泌IAA能力测定 　　接种0.5 mL菌悬液于装有灭菌30 mL King液体培养基，同1.3条件震荡培养离心后，取菌株悬浮液1 mL滴置于检测板上，加入等量S2比色液，同时在比色液中分别加50 μg/mL、30 μg/mL、10 μg/mL的标准植物生长激素（IAA）1 mL作梯度对照，15 min内室温下观察