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金橘类胡萝卜素提取的研究 　　【摘 要】以罗浮金柑类胡萝卜素得率为优先工艺指标,通过单因子实验及正交实验优化罗浮金柑中类胡萝卜素的提取工艺。实验结果表明:原料为冷冻干燥的金橘粉碎至60～80目,浸提溶剂为1:1(V/V)的石油醚-丙酮混合溶液,料液比为1:20,浸提液pH值为7.5,在40℃提取2次,每次提取时间为60 min。此条件下,类胡萝卜素得率最高,为46.10 μg/g。 　　【关键词】罗浮金柑;类胡萝卜素;提取工艺 　　中图分类号:Q503 文献标识码:A 文章编号:1009-8283(2009)09-0289-02 　　 　　类胡萝卜素是人类最早知道的食品着色剂,且是自然界产量最大的色素之一,其存在非常广泛,自然界每年可产 1亿t以上的类胡萝素。近年来,有关研究表明,类胡萝卜素对一些现代疾病有防治作用,尤其对一些肿瘤的发生和发展可起到预防延缓作用。 　　金橘中虽然不含有β-胡萝卜素,但作为植物类胡萝卜素代谢主链上的成员――隐黄素却大量存在,它同时也被证明对预防消化道癌具有重要意义,且β-隐黄素比β-胡萝卜素具有更高的抗癌活性。 　　鉴于金橘类胡萝卜素的功用,本章以罗浮金柑为原料、类胡萝卜素得率为指标,对其类胡萝卜素的提取工艺进行了初步研究。期望以此更好地综合利用金橘资源。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 实验材料 　　自然成熟的罗浮金柑,于11月采自广西阳朔绿果实业果园。真空冷冻干燥后,粉粹置于冷藏柜中保存待用。 　　1.2 实验仪器与试剂 　　仪器722光栅分光光度计:上海精密科学仪器有限公司UV-755B紫外可见分光光度计:上海精密科学仪器有限公司 　　 试剂 丙酮、乙醚、石油醚、氯仿,均为分析纯。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 金橘类胡萝卜素的提取 　　 取 10 g罗浮金柑粉末,分别在不同条件下加入不同萃取剂振摇数次,于暗处静置,待过滤。将直径15 cm的快速滤纸置于波纹漏斗中(滤纸应高出漏斗边沿1～2 mm),先用少量萃取剂润湿滤纸,使之与漏斗紧密贴切,再用少量萃取剂清洗漏斗,弃去滤液。将前述待过滤的萃取液转入漏斗(转移时,尽量将试样移入漏斗底部),随即用装有萃取剂的洗瓶快速洗涤具塞量筒3～4次至筒壁完全干净,并自上而下快速以螺旋状洗涤漏斗,致使试样全部集中于漏斗底部,盖上滤纸,待滤液完全滤干后,再用洗瓶洗涤样品,反复洗涤过滤数次(每次滤液完全滤净后再进行下一次的洗涤和过滤),直至被萃取的试样呈白色为止,全部滤液收集于棕色容量瓶中,以萃取剂定容至刻度,摇匀待比色。 　　1.3.2 金橘类胡萝卜素含量测定的方法 　　 精确称取一定量胡萝卜素标样用石油醚稀释,以石油醚作空白,用1 cm比色皿,在300～600 nm波长范围内用紫外可见分光光度计进行波谱扫描,测定类胡萝卜素的最大吸收波长,作为胡萝卜素的测定波长。 　　将萃取所得的类胡萝卜素定容,以石油醚为空白,波长452 nm,1 cm比色皿测定其吸光值,并从标准曲线求得胡萝卜素含量C(μg/mL),按式1计算类胡萝卜素得率Q(μg / g): 　　 　　1.3.3实验设计方法 　　用单因子实验法考察原料处理方式、浸提溶剂配比、浸提温度,并用正交分析实验法综合分析料液比、浸提时间、浸提次数及提取液pH值对金橘类胡萝卜素提取的影响。 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2.1 最大波长的确定 　　由于类胡萝卜素在不同溶剂中的λ????max值可能不一样,且在不同文献中,类胡萝卜素在同种溶剂中的λ????max可能有一定的差异。因此,本实验通过紫外可见分光光度计对类胡萝卜素标准品在300～600 nm波长范围内进行紫外扫描,确定实际最大吸收波长。从吸收光谱图中可以看出,溶液在波长452 nm处具有最大吸光度,且吸收范围较宽,所以选择吸收波长452 nm作为定量测定波长。 　　2.2 类胡萝卜素标准曲线的绘制 　　用天平准确称取0.0025 g类胡萝卜素,溶于无水乙醇,定容至25 mL,制得100 μg/mL类胡萝卜素标准液。分别吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL标准液,用石油醚定容至25 mL,以石油醚为空白,测吸光值,其结果做线性回归,得工作曲线,画出工作曲线。所求直线回归方程为:y =0.0575+0.037 x R2 =0.9919 　　2.3 萃取溶剂的选择 　　准确称取干燥金橘粉10份,每份10 g,在其他条件相同的情况下,分别加入等量的不同浸提剂进行浸提,得到的滤液稀释到相同倍数后,测定其吸光度,计算得率,比较浸提效果。得知,单一溶剂中,金橘类胡萝卜素在石油醚中的溶解性高于丙酮、乙醚和乙醚。而混合溶剂则以石油醚与丙酮的效果最好,选择1:1(V/V)石