针刺激活下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素相关神经元特异性的研究.docVIP

针刺激活下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素相关神经元特异性的研究 　　摘要：目的 观察针刺调节下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴（HPA）功能的穴位特异性，并探讨针刺对HPA轴的调节是否具有累积效应。方法 实验用SD雄性成年大鼠。胞外记录下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素相关神经元电活动，比较针刺同一经脉不同神经节段、相同或相邻神经节段不同经脉的20个穴位对该神经元的激活效应及强度的差异，并观察不同针刺次数对不同时间点外周血皮质酮水平的影响。结果 针刺20个穴位对该神经元的激活效应由大到小的顺序：肾俞期门肝俞大椎章门腹哀太乙郄门水沟商曲腹通谷足三里太冲内关京门阳陵泉承山筑宾三阴交膻中。结论 与肾上腺位于相同或相邻神经节段的膀胱经、肝经的穴位具有特异性效应，且有累积效应。 　　关键词：针刺；下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素相关神经元；特异性穴位；大鼠 　　中图分类号：R242 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0034-03 　　近年来，关于针刺调节下丘脑-垂体-肾上腺皮质（HPA）轴功能的研究较多[1-8]，但存在的问题是：①这些研究多停留在某个或某几个穴位对HPA轴的调节效应或机制的分析；②对同一种疾病研究穴位的选择各异，而效应相近。关于针灸穴位特异性研究涉及较少，对临床针灸选穴原则的确立指导意义不大。 　　已有的研究表明，调节应激的不同输入信号在下丘脑室旁核（PVN）的小细胞神经元汇合[9]。这些神经元合成并释放下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone，CRH））和血管加压素，代表神经激素对促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮释放调节的固定终级共同通路。因此，我们以此种产生“应激的刺激”作为对照，遴选和验证能特异性调节下丘脑CRH神经元功能活动的有效穴位。 　　本研究以针刺同一经脉不同神经节段、相同或相邻神经节段不同经脉上的20个穴位激活下丘脑室旁核区特异分泌CRH相关神经元电活动的强度差异为指标，遴选这种效应的特异性相关穴位。并通过观察不同针刺次数刺激特异性相关穴位，在不同时间点外周血皮质酮水平的变化，探讨针刺对HPA轴的调节是否具有累积效应。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要仪器与试剂 　　液压微电极操纵器（SM-25C日本），微电极输入DAM50（美国WPI公司），POWERLab生物机能信号采集分析处理系统（澳大利亚ADInstruments生产），光谱扫描多功能酶标仪（Thermo Scientific Varioskan Flash，美国），韩式穴位神经刺激仪（HANS-200B）。乌拉坦（湖北盈和化工有限公司），肝素（海纳肝素钠生产公司），氢化可的松（Sigma公司，纯度≥99%），ELISA试剂盒（CSB-E07014r，武汉华美）。 　　1.2 动物与造模 　　雄性成年SD大鼠，体质量240～280 g，中国科学院遗传与发育生物学研究所提供，动物合格证号：SCSK-2002-0016，为普通级动物。标准啮齿类动物饲料分笼喂养，室温（20±2）℃，光照12 h。实验动物的使用严格遵守实验动物的管理及伦理委员会的规定。 　　10%乌拉坦麻醉（腹腔注射，1.1 mL/100 g）。右侧颈部剪毛，碘酒、酒精消毒后沿颈静脉走行剪开颈部皮肤（1 cm），分离颈静脉至远心端及远心端分支处，于远心端套线（4-0）牵拉颈静脉，用细塑料管（Φ 0.2 cm）缓慢插入颈静脉向心端，固定，观察无渗血后4-0线缝合切口。细塑料管另一端与三通相连，分别给予1%肝素及氢化可的松注射液（先用无水乙醇配成浓缩液，使用时再用0.9%氯化钠溶液稀释，10 mg/kg静脉注射）[10]。全部操作均在无菌条件下进行。在上述手术完成后，将大鼠移至KOPF-900型大鼠立体定位仪上，呈俯卧位，双耳用耳棒固定，上齿钩挂在鼠头夹中，口鼻部用鼠头夹夹紧。于颅正中线纵向切开皮肤，分离切除皮下组织，去除骨膜，暴露出前后囟，将前后囟调至同一水平面。参照大鼠脑图谱（Paxions和Watson，2006）标定PVN在颅骨二维坐标的位置：后囟前6.9～7.4 mm，旁开约0.4～0.9 mm。在此范围中央先用颅骨钻钻开一小孔，再用咬骨钳沿钻开的小孔小心剔除约5 mm×3 mm颅顶骨，然后在显微镜下用游丝镊去除脑膜。 　　1.3 单细胞活动的细胞外记录 　　采用充灌1%滂胺天蓝的玻璃微电极（尖端小于0.5 ?m，阻抗为15～20 MΩ），在液压微电极操纵器控制下根据PVN三维空间坐标定位（后囟前6.9～7.4mm，旁开约0.4～0.9 mm，深度约前后囟水平下7.3～8.3 mm），将记录微电极插入PVN，当记录微电极在PVN记录到神经元放电时，分别进行