对流免疫电泳(免疫学实验)学习资料.pptVIP

. . . . . . . . 对流免疫电泳 * 一、基本原理 在pH值8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白只带有微弱的负电荷，而且它分子又较大，所以泳动慢，受电渗作用的影响也大，往往不能抵抗电渗作用，故在电泳时，反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质常带较强的负电荷，分子又较小，所以泳动快，虽然由于电渗作用泳动速度减慢，但仍能向正极泳动。如将抗原置阴极，抗体置阳极，电泳时，两种成分相对泳动，一定时间后抗原和抗体将在两孔之间相遇，并在比例适当的地方形成肉眼可见的沉淀线。这样由于电泳的作用，不仅帮助抗体定向移动，因而加速了反应的出现，而且也限制了琼脂扩散时，抗原抗体向四周自由扩散的倾向，因而也提高了敏感性，本法比琼脂扩散法的灵敏度要高10～16倍，而且反应时间短，可用于各种蛋白的定性和半定量测定。 * 二、对流免疫电泳 即双扩+电泳技术用途：同双扩优点：快、敏感性高缺点：分辨力低 * 三、操作方法 1．制琼脂板 以pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液配成1%～1.5%琼脂凝胶板，厚度2mm～3mm。 2．打孔 琼脂冷却后，按图打孔，打成对的小孔数列，孔径0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔内琼脂，封底。 3．加样 一对孔中，一孔加抗原，另一孔加抗体。 4．电泳 将抗原孔置于负极端。电流强度3mA/cm～6mA/cm，电泳时间30min