高效液相法测定酸水解芫花黄酮苷元含量剖析.docVIP

高效液相法测定酸水解芫花黄酮苷元含量剖析 　　[摘 要] 随着社会的不断进步，经济的高速发展，人们生活水平有了很大提高，对于酸水解芫花黄酮苷元含量进行研究的过程中，或多或少会遇到一些问题，本文就对酸水解芫花黄酮苷元含量进行分析，浅谈高效液相法测定酸水解芫花黄酮苷元含量分析。 　　[关键词] 高效液相法 酸水解芫花 黄酮苷元 含量 　　 　　在进行酸水解芫花黄酮苷元含量分析中，难免会遇到一些困难和一些问题，在这里笔者就提出一种高效液相法，对于高效液相法测定酸水解芫花黄酮苷元含量进行分析。笔者就高效液相法测定酸水解芫花黄酮苷元含量进行分析。 　　一、芫花介绍 　　芫花（DaphnegenkwaSieb1etZucc）为瑞香科植物芫花DaphnegenkwaSieb.etZucc.的干燥花蕾，始载于《神农本草》，味苦、辛，性温，有毒，归肺、脾、肾经。芫花为传统的泻下逐水药，具有泻水逐饮，解毒杀虫功效，其主要化学成分为黄酮类、二萜原酸酯类化合物等[1，2]。天然黄酮类化合物多以苷的形式存在，目前多采用酸解的方法将黄酮苷水解成苷元，再测定样品中苷元的含量。本实验通过高效液相色谱（HPLC）法对水解前后芫花药材黄酮苷元成分木犀草素、芹菜素、芫花素进行了测定和比较，旨在为其质量研究提供参考。 　　二、高效液相法测定酸水解芫花黄酮苷元含量 　　2.1仪器与试剂 　　Agilent1100高效液相色谱仪；VWD紫外检测器；Agilent色谱工作站；HH-4数显恒温水浴锅。木犀草素、芹菜素对照品（中国药品生物制品检验所）；芫花素对照品由中国中医科学院中药研究所毛淑杰研究员提供。甲醇为色谱纯，盐酸为分析纯，所用水为重蒸水。Shimadzu高效液相色谱仪(包括自动进样器，二元输液泵，柱温箱，示差折光检测器)；色谱柱：Wa-tersSymmetryC18（250mm×4.6mm，5μm）。硫酸(分析纯,上海试剂总厂),丁醇、乙醇、丙酮(色谱纯,美国Sigma-Aldrich公司),葡萄糖、乙酸、丁酸标准品(分析纯,国药集团化学试剂有限公司)。 　　2.2色谱条件 　　色谱柱：DiamonsilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；检测波长：338nm；流速：1.0mL?min-1；流动相：甲醇-0.4%HAc（80:20），柱温30℃，理论塔板数按木犀草素、芹菜素、芫花素均不低于8000。取对照品溶液和供试品溶液，各20μL进样，采用C18色谱柱，甲醇-水（80?U20）为流动相，柱温30℃，流速1.0ml?min，进行色谱分析。AminexHPX-87H型色谱柱,柱温为15℃,流动相为0.05mmol?L-1的硫酸,先后经抽滤、超声波脱气15min处理,流速为0.5ml?min-1,检测器为示差折光检测器,进样量20μl。色谱柱:SepaxSapphire-C18(5μm,4.6mm×250mm);流动相:甲醇-0.1%醋酸溶液(35∶65);柱温:40℃;流速1.0ml/min,20μl进样。检测波长为283nm。 　　2.3对照品溶液的制备 　　精密称取木犀草素、芹菜素、芫花素对照品适量，置于容量瓶中，以甲醇分别配成含木犀草素22.8μg?mL-1、芹菜素64.4μg?mL-1、芫花素96μg?mL-1的对照品溶液。 　　2.4水解供试品溶液的制备 　　称取烘干的芫花粉末（40目）约1g，精密称定，精密加入5%盐酸-甲醇50mL，称重，75℃提取2h，放冷后补足减失的重量，摇匀，过滤，续滤液经微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得水解后供试品溶液。 　　2.5未水解供试品溶液的制备 　　称取烘干的芫花粉末（40目）约1g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称重，75℃提取2h，放冷后补足减失的重量，摇匀，过滤，续滤液经微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得未水解供试品溶液。 　　2.6样品测定 　　精密吸取各对照品溶液及水解、未水解供实品溶液各10μL,注入液相色谱仪中,绘制液相色谱图。 　　三、高效液相法测定酸水解芫花黄酮苷元含量分析结果与讨论 　　3.1线性关系考察 　　精密吸取“1.3”项下各对照品溶液2，4，6，8，10，20μL进行HPLC分析，以对照品峰面积Y为纵坐标,以对照品进样质量X（μg）为横坐标,绘制标准曲线。木犀草素、芹菜素、芫花素的进样量分别在0.0456~0.456μg，0.1288~1.288μg，0.192~1.92μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。回归方程依次为： 　　Y=5262.5X-43.231，r=0.9998； 　　Y=4289.8X+72.313，r=0.9995； 　　Y=3997.8X-273.3，r=0.9996； 　　3.2稳定性试验