潮汕人群贲门H+pylori感染、CD74表达与上皮增生的相关性研究-病理学与病理生理学专业论文.docx

中文摘要 背景和目的 幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，H. pylori）是一种微需氧革兰氏阴性菌，定植于人 上消化道。流行病学资料显示，全世界人群中的 H. pylori 感染率超过 50%，发展中国家甚 至超过 80%。作为“一级致癌因子” ， H. pylori 感染后引起胃粘膜慢性炎症，消化性溃疡， 并与胃粘膜相关淋巴组织(M ALT) 淋巴瘤、胃腺癌等消化系统肿瘤密切相关，甚至还与某 些血管性疾病、自身免疫系统疾病、皮肤病、糖尿病等其它系统疾病相关。虽然 H. pylori 发现将近 30 年，但是其感染途径、发病机制，特别是与肿瘤发生发展机制尚不明确。贲 门粘膜组织细胞结构和 pH 环境与远端胃相比，对 H. pylori 定植、生存、感染有自身特殊 性，关于贲门粘膜组织感染 H. pylori 后，引发相关病变的报道，较为少见，其 H. pylori 的 致病机制更不明确。研究发现 CD 74 可作为 H. pylori 的受体，增强 H. pylori 的吸附能力， 加强其致病性。本实验首先用改良 Giemsa 染色、H pylori 特异性免疫组织化学染色，检测 H. pylori 在潮汕人贲门普查及活检标本中的分布情况，分析在不同病理改变时 H. pylori 定 植密度的差异；其次运用免疫组织化学染色检测贲门腺上皮 CD 74 蛋白的表达水平，比较 分析 CD74 蛋白表达水平与 H. pylori 定植密度的关系，进一步运用 Simple 同部位标记和消 除抗体法、免疫荧光双重标记技术，观察 CD74 蛋白表达与幽门螺杆菌定植分布的原位关 系；最后运用免疫组织化学染色检测 Ki-67 阳性细胞的增殖指数，分析 H. pylori 定植密度、 CD 74 蛋白的表达与贲门上皮 Ki-67 阳性细胞增殖水平之间的关系，初步探讨幽门螺杆菌致 病机制，为贲门癌前病变的发生发展提供一定的根据。 材料和方法 材料 收集汕头大学附属肿瘤医院、汕头大学第一附属医院胃镜室和病理科及揭阳市人民医 院病理科普查标本共218例，其中男性146例，女性72例，最小年龄22岁，最大年龄80岁， 平均年龄56.6岁。 方法 HE 染色 常规 HE 染色，观察贲门粘膜的炎症等级和上皮增生情况。 Giemsa 染色 改良 Giemsa 染色，观察 H pylori 在组织中的定植密度和分布 3. 免疫组织化学染色 SP 免疫组织化学法：观察 H pylori 免疫阳性细菌在贲门粘膜组织中分布情况；CD74 单克隆抗体 免疫组织化学染色，观察腺上皮细胞的表达情况；Ki-67 单克隆抗体免疫组织 化学染色观察上皮细胞增生情况。 4. Simple 同部位标记、消除抗体法和免疫荧光双重标记 Simple 同部位标记、消除抗体法和免疫荧光双重标记技术，观察 H pylori 和 CD74 在贲 门粘膜组织中的分布，与腺上皮细胞的表达情况，分析幽门螺杆菌的分布位置和 CD74 的 蛋白表达水平的相互关系。 5. 图像分析法 应用 Leica IM 50 图像采集系统和 Image-Pro Plus 6.0 图像分析系统，对 CD74 和 Ki-67 染色结果分析，CD 74 蛋白表达水平采样计算图像阳性表达的平均光密度，K i-67 采用计算 每张切片的阳性标记指数 (Cell proliferation count Cpc) ，分析表达情况。 6. 统计分析 应用 SPSS13.0 对统计结果进行分析，采用方差分析，卡方检验，Spearman 相关分析。 结果 1、（1）运用改良 Giemsa 染色和 SP 免疫组织化学法检测 H pylori 的分布发现：H.pylori 主要定植于贲门粘膜表面、腺体的腺腔内和血管的周围，部分 H.pylori 具有红细胞亲和性； （2）运用 Simple 同部位标记、消除抗体法和免疫荧光双重标记技术分析 H pylori 的分布 位置和 CD74 的蛋白表达水平的相互关系发现：部分 H pylori 与 CD 74 强表达的细胞结合 紧密。 2、运用单向方差分析发现：H pylori 感染阴性和 H pylori 感染阳性贲门粘膜中 CD74 表 达有显著的统计学差异（p0.01）；在 H pylori（+）、H pylori（++）、H pylori（+++）各组 之间，随 H pylori 定植密度加重，CD 74 的表达相应增强，各组间的差异均有统计学意义 （p0.05）。 3、（1）运用卡方检验分析 H pylori 定植密度与炎症等级之间有显著统计学意义 X2=20.71 （p0.01）：炎症等级随着幽门螺杆菌感染程度加重而升高。（2）运用单向方差分析