大豆提取物PC对食源性肥胖大鼠的作用及肥胖儿童的血浆蛋白组学研究-儿科学专业论文.docx

大豆提取物 PC 对食源性肥胖大鼠的作用及 肥胖儿童的血浆蛋白组学研究 中文摘要 第一部分 PC 对食源性肥胖大鼠作用的研究 目的：观察大豆提取物 PC 对食源性肥胖大鼠体重和胰岛素抵抗的影响并探讨其 机制。 方法：用高脂高蛋白饮食致大鼠肥胖（肥胖大鼠模型），体重大于对照组平均体 重加 1.96 倍标准差定为食源性肥胖大鼠（DIO）。研究大鼠分为五组：（1）肥胖对照 组（DIO）；（2）肥胖组+灌服 150mg/kg PC(DIO+PC150)；（3）肥胖组+灌服 75mg/kg PC(DIO+PC75)；（4）肥胖组+灌服 37.5mg/kg PC(DIO+PC37.5)；（5）10 只普通饲料 组大鼠作为正常对照组（Control, CN）。每日一次，连续灌服 PC 8 周。处死大鼠，检 测/记录体重、摄食量、肾周脂肪、睾周脂肪以及肝、肾脏器官指数变化；按照试剂 盒的要求检测血糖、血清胰岛素、血脂、肝功能等指标，用 ELISA 法检测血清脂联 素、血清瘦素、血清抵抗素水平，并观察各指标变化；肝组织用不同方法切片、染色 后，分别用光镜和电镜观察其病理改变。 结果：（1）灌服 PC 后，肥胖大鼠的摄食量、体重、肾周脂肪、睾周脂肪以及肝 脏器官指数均较模型组明显减少（P0.05，P0.01）。（2）灌服 PC 后，血清胰岛素、 HOMA-HR、血清抵抗素、瘦素、胆固醇、甘油三酯、AST、ALT 水平均显著降低而 高密度脂蛋白水平升高，与模型组比较（P0.05，P0.01）。LDL 和脂联素水平无明 显变化（P0.05）。（3）光学显微镜显示：食源性肥胖大鼠肝组织有大量脂肪变性， 胞质内充满大小不一的脂滴空泡，血管周围炎症细胞浸润严重。电镜检查显示：食源 性肥胖大鼠肝脏肝脂滴明显增多，线粒体肿胀，部分有纤维化。而灌服 PC 大鼠可明 显减轻肥胖大鼠肝脏组织结构的病理改变轻微。 结论：灌服 PC 具有明显的减轻体重和改善胰岛素抵抗的作用，该作用与抑制摄 食量，降低肾周脂肪、睾周脂肪重量及体脂比、减轻血清胰岛素、HOMA-HR、血清 抵抗素、瘦素水平有关。PC 对肥胖的脂肪肝也有一定的防治作用，使 AST、ALT 水 平降低。其机制可能与其降低瘦素水平和减轻肝脏的脂肪变性有关。 中文摘要 大豆提取物 PC 对食源性肥胖大鼠的作用及肥胖儿童的血浆蛋白组学研究 关键词：PC；食源性肥胖；胰岛素抵抗；脂肪肝 第二部分 PC 对 3T3-L1 脂肪细胞增殖、 分化及 GLUT4 蛋白表达的影响 目的：观察 PC 对前脂肪细胞增殖、生长周期、分化及细胞膜上 GLUT4 蛋白表 达的影响，探讨 PC 对减轻体重及改善胰岛素抵抗可能的作用机制。 方法：采用 MTT 和流式细胞仪法观察 PC 对 3T3-L1 细胞增殖和生长周期的影响； 用诱导剂诱导 3T3-L1 细胞分化，并观察 PC 对细胞分化的作用；采用流式细胞仪和 免疫组化两种方法观察 PC 对脂肪细胞膜上 GLUT4 蛋白表达的影响。 结果：（1）PC 能显著抑制 3T3-L1 细胞的增殖和分化； （2）PC 影响脂肪细胞生长的周期，使其停止于 S 期； （3）PC 使脂肪细胞膜上 GLUT4 蛋白表达水平显著升高（P0.05，P0.01）。 结论：PC 减轻体重的作用可能与其抑制 3T3-L1 脂肪细胞的增殖和分化，干扰其 正常的生长周期有关；其改善胰岛素抵抗作用可能与 增加脂肪细胞细胞膜上的 GLUT4 蛋白表达，促进葡萄糖的转运有关。 关键词：前脂肪细胞，细胞增殖，细胞分化，GLUT4 第三部分 肥胖儿童血浆蛋白质组学研究和 差异蛋白质的亚细胞定位 目 的：筛选肥胖儿童血浆中的差异蛋白质，为肥胖研究及 PC 药物作用机制的 研究提供新的靶点。 方 法：收集肥胖儿童及健康儿童血浆，用免疫亲和柱去除高丰度蛋白，用胰蛋 白酶酶解蛋白，运用基于液相色谱串联质谱无标记物（Label-free）的新技术进行蛋 白定量；通过 Maxquant 软件检索人的数据库 Uniport，获得候选蛋白信息，找出差异 蛋白；并用 CELLO v.2.5 软件将筛选出的差异蛋白进行亚细胞定位。 结 果：（1）经过对儿童肥胖蛋白质组学检测，成功发现了 14 个差异蛋白质，主 要是与凝血和免疫功能相关的蛋白。其中肥胖儿童血浆中上调的免疫球蛋白有 2 种， 下调的免疫球蛋白有 3 种；补体 C5、C6 和不同因子 B、I 均上调，共有 4 种。血红 蛋白 α 和 β 亚单位、纤维蛋白原 α 和 β 亚单位均上调，而富含组氨酸糖蛋白下调。（2） 筛选出的差异蛋白中位于细胞外的蛋白质最多，高达 57%，其次是细胞核 29%，位 于细胞质膜以及细胞外膜的蛋白质均为 7%。 结 论：（1）筛选出了肥胖的差异蛋白共 14