二羟基维生素D3对人乳腺癌细胞MCF7ER MDAMB231ER作用的实验分析.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 前 言 乳腺癌是造成妇女因恶性肿瘤死亡的第二位危险因素，是危害妇女健康的重 要原因。目前对于乳腺癌主要是通过手术、放疗、化疗、内分泌治疗的方法进行 的，近年来也出现了生物靶向治疗的新方法，这些治疗手段对于延长患者的生存 时间、提高患者的生存质量具有重要的意义。但是目前认为乳腺癌的发病率将会 随着人类生存环境的恶化以及现代社会饮食习惯的改变继续提高，所以研究制定 更为有效的乳腺癌预防与治疗方法具有非常重要的意义。 目前该病的发病率、死亡率呈现逐年增加的趋势。目前已有研究证实，1， 25二羟基维生素D3对肿瘤的预防作用及其作为潜在的抗癌治疗手段的可能性。 Berkovich[1]等合成一种新的骨化三醇类似物BGP-15，检测其对恶性乳腺癌细胞 株（MCF-7）的抗增殖作用。这种新的类似物导致MCF-7细胞株存活率显著下降； 且有研究表明血浆中高水平的维生素D与环氧化酶抑制剂可降低乳腺癌的发病机 率［2］。 1,25二羟基维生素D3 是维生素D的活性形式，具有基因组和非基因组两种机 制介导的生物学效应[3]。它除了有传统的调节钙磷代谢平衡作用外，还具有调节 免疫、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞增殖及促其凋亡的作用[4] ,这已成为肿 瘤治疗的研究热点。近年来，随着对维生素D研究的深入，研究者发现活性维生 素D即1,25(OH)2D3在体外实验中显示具有抑制多种肿瘤细胞增殖的作用，甚至可 以使多种致癌物质诱导的肿瘤增生过程延缓乃至于消失，对于乳腺癌细胞株也具 有抑制作用[5-8]，而且与化疗药物、放射治疗联合应用效果更明显[9-10]。还有研究 认为1,25(OH)2D3，通过与细胞膜上的维生素D受体( VDR)相互作用，抑制细胞增 殖，诱导分化和凋亡。 1,25(OH)2D3与其他药物的联用已有先例，它单独联合化疗对肿瘤治疗可能会 导致高钙血症等不良反应，因此临床上限制了该药物的使用，而该药与TAM联合 治疗，可能能够降低药物的使用量，并减少不良反应。另一方面，1,25(OH)2D3 具有抑制前列腺素途径的作用，并且包含了对COX-2D 抑制，可以增加药物的敏 7 感性，所以两种可能有互补的基础。本实验研究1,25(OH)2D3对乳腺癌细胞的抑制 和凋亡作用，并对其抑制的机制进行了初步的探讨，旨在为将来临床上应用 1,25(OH)2D3治疗乳腺癌提供实验基础和新的思路。 8 实 验 材 料 1.材料和方法 1.1 实验材料 1.1．1 细胞株：人乳腺癌细胞 MCF-7（ER+）和 MDA-MB-231（ER-）由北纳创 联公司提供。 1.1.2 主要仪器设备和材料 （1）．Heraeus 细胞培养箱 德国 Heraeus 公司 （2）．医用微波炉 广东美的有限公司 （3）．BCD-256H 型冰箱 青岛海尔公司 （4）．REGAL 超净试验台 上海合恒仪器设备有限公司 （5）．Motic AE21 倒置显微镜 麦克奥迪 AE21( MOTIC AE21 ) （6）．YDS-100B-125 型液氮生物容器 成都金凤液氮容器有限公司 （8）．HH.W21.420 电热恒温水箱 天津泰斯特仪器有限公司 （9）．eppendorf 低温高速离心机 德国艾本德公司 （10）．YXOG02 型电热式蒸汽消毒锅 天津泰斯特仪器有限公司 （11）．costar 3516型 六孔板、CORNING Flask 430168 细胞培养瓶 、 corning T-1000-B-R-S 1000ul无菌盒装吸头 、 corning T-400-R-S 10ul无菌盒装吸头[长] 、 corning MCT-150-C 1.5ml离心管 美国 corning 康宁 （12）．1000ul、100ul、10ul 移液枪 DX02871 （13）酶联免疫检测仪 德国艾本德公司 （14）流式细胞检测仪 美国贝克曼库尔特有限公司 9 1.1.3 主要试剂 （1）胎牛血清 Hyclone （2）改良型 RPMI-1640 培养基 Hyclone （3）Annexin V-FITCPI 凋亡检测试剂 北京嘉美诺斯有限公司 （4）胰酶细胞消化液 长沙艾佳生物公司 （5）青霉素-链霉素溶液 碧云天生物技术公司 （6）PBS 缓冲液 长沙艾佳生物公司 （7）二甲基亚砜（DMSO） 美国 sigama （8）碘化吡啶(PI) 美国 sigama （9）四甲基偶氮唑盐（MTT） 美国 sigama （10）TAM 江苏扬子江制药有限公司 （11）1,25(OH)2D3(罗盖全) 瑞士巴塞尔豪夫迈·罗氏有限公司 （12）灭菌注射用水 双鹤药业 （13）75%乙醇溶液 湖南省人民医院药学部制剂中心 1.2 主要溶液的配制 1.2.1 PBS配制：准