雌激素在AD样tau蛋白异常磷酸化中的作用及机制研究-神经病学与神经康复专业论文.docxVIP

华中科技大学硕 士学位论 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 1 PAGE 1 雌激素在 AD 样 tau 蛋白磷酸化中的 作用及机制研究 硕士研究生 瞿 娜 导 师 张 蕲 中文摘要 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是一种随年龄的增长发病率 逐渐增高的神经退行性疾病。以记忆力减退，认知功能障碍为主要临床特 征，病情呈进行性加重，在几年内可以丧失独立生活的能力，病程约 10 年左右，常因并发感染而死亡。老年男性和女性由于激素水平下降都表现 出不同程度的认知功能和学习记忆的障碍。流行病学调查显示：绝经期的 妇女由于雌激素水平的下降较同龄男性更易患 AD，而在绝经早期适量给 予雌激素治疗却能有效的改善或推迟 AD 的发病。但具体作用机制尚不清 楚。AD 的主要病理特征为神经纤维缠结及老年斑的形成。神经纤维缠结 与学习记忆受损的程度成正相关。异常磷酸化的微管相关蛋白 tau 是神经 纤维缠结的主要成分，多种激酶参与了异常磷酸化 tau 蛋白的形成，其中 糖原合酶激酶 3（GSK-3）是导致神经纤维缠结最主要的激酶，有 GSK-3α 和 GSK-3β两种亚型，并且 GSK-3 与老年斑的形成关系密切。雌激素主 要通过雌激素受体（estrogen receptor，ER）来发挥作用，已知的雌激素 受体主要分 ERα和 ERβ。前期工作基础提示雌激素可以通过抑制 GSK-3 的活性来减少 tau 蛋白的过度磷酸化。但当雌激素水平下降时，雌激素受 体与 GSK-3 及 tau 蛋白之间的具体作用机制还不清楚。对其机制及作用的 探讨将对更年期女性防治 AD 提供有效的科学依据及理论基础。本实验通 过对 3 月龄的 SD 雌性大鼠去势（ovariectomy，OVX）构建低雌激素动物 模型。分别在去势后不同的 8 个时间点，通过免疫蛋白印迹法、免疫组织 化学法等方法，检测 SD 大鼠脑内的 GSK-3 的活性、tau 蛋白的磷酸化水 平、雌激素受体及磷酸化雌激素受体的表达及分布等。结果显示雌性 SD 大鼠随着去势后时间的延长 ERα在海马区的表达量逐渐降低，而 GSK-3 在海马区的表达则逐渐增高，并且伴有 ERαS118 位点磷酸化水平的显著 增高，在去势后 4 到 12 周这种改变尤为明显。而检测 ERβ及其磷酸化位 点 ERβS87，发现没有显著差异。同时还检测了磷酸化的 tau 蛋白，发现 在去势后磷酸化 tau 蛋白的表达量是增高的，并在去势后 4 到 12 周的表 达量明显增高。同时，组化结果提示去势后雌激素受体 ERα及磷酸化雌 激素受体 ERαS118 在海马 CA1 区的分布逐渐由胞浆向胞核内转移，而 GSK-3 在海马 CA1 区主要分布于胞浆。研究结果提示： (1) 去势后主要通过 ERα的表达的减少来调节 GSK-3 的活性。 (2) 去势后 4 到 12 周磷酸化的雌激素受体表达量与 GSK-3 的活性及 磷酸化 tau 蛋白的表达量成正相关。 (3) 去势后雌激素受体 ERα及磷酸化 ERαS118 在胞浆胞核的分布与 GSK-3 之间存在联系。 关键词：阿尔茨海默病；雌激素受体；糖原合酶激酶-3 The Effect and Mechanism of Estrogen in Alzheimer-Like Tau Protein of Phosphorylation Postgraduate: Na Qu Supervisor: Prof. Qi Zhang Abstract Alzheimer’s disease (AD) is a neurodegenerative disorder defined by progressive memory loss and cognitive impairment and at the molecular level by the presence of neurofibrillary tangles (NFTs) and insoluble β-amyloid (Aβ) plaque. Risk for Alzheimer’s disease is associated with age-related loss of estrogen in both women and men. In post-menopausal women, the precipitous depletion of estrogens is hypothesized to increase susceptibility to AD pathogenesis, a concept largely supported by epidemiologi