低分子肝素对脓毒症大鼠肺血管内皮细胞功能的影响-临床医学专业论文.docx

万方数据 万方数据 The Impact Of The Septic Rats Vascular Endothelial Cell Function After Treat With Low Molecular Weight Heparin A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Cui Lei (Critical care medicine) Dissertation Supervisor: Cheng Qinghong May, 2015 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所 知，除文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向 国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并 允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论 文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 摘 要 目的：本研究通过静脉注射内毒素（LPS）制备脓毒症大鼠模型，通过测定各组大鼠血清 sTM、 sE-selectin 表达的变化，以及观察肺组织病理形态学变化和肺组织 VEC 凋亡的变化，探讨 低分子肝素对脓毒症大鼠血管内皮细胞损伤和凋亡的作用，及其可能的机制，为脓毒症的治 疗提供理论依据。 方法： (1) 将 72 只 SPF 级的 SD 雄性大鼠分为对照组（18 只）、脓毒症组（18 只）、脂多糖+肝素 (LPS+UFH)组(18 只)和脂多糖+低分子肝素（LPS+LMWH）组(18 只)，各组再按照观察时间 点平均分为造模后 6h、12h 和 24h 各 3 个亚组，每亚组 6 只。 (2) 取造模后各时间点各组大鼠的肺组织制作石蜡切片，并分别进行 HE 和 Hoechst 33258 染色，用以检测肺血管内皮细胞的损伤和凋亡情况。 (3) 运用免疫组化法检测各实验组大鼠肺各时间点血管内皮细胞 Bcl-2、Bax 的表达量； (4) 用 ELISA 的方法检测实验组大鼠肺各时间点血清中 sTM 和 sE-selectin 的表达。 结果： (1) HE 染色结果显示脓毒症导致肺泡腔和小血管内红细胞聚集，并且而随着建模时间的延 长症状加剧。LPS+UFH 组和 LPS+LMWH 组与脓毒症组相比，肺水肿及红/白细胞浸润的现 象显著改善，其中 LPS+LMWH 组较 LPS+UFH 组改善效果明显。 (2) Hoechst 33258 染色结果表明，脓毒症发生时易导致肺血管内皮细胞呈现不同程度的核 固缩，且随着时间延长，血管内皮细胞的凋亡显著增加；LPS+UFH 组和 LPS+LMWH 组较 脓毒症组 VEC 凋亡显著降低（P0.01），与对照组相比，LPS+UFH 组凋亡细胞核明显增多 （P0.01），LPS+LMWH 组凋亡细胞核较 LPS+UFH 组减少（P0.05）。 (3) 免疫组化检测 Bcl-2、Bax 结果表明，LPS+UFH 组和 LPS+LMWH 组血管内皮细胞 Bax 蛋白的表达均明显低于脓毒症组（P0.01）；每组 Bcl-2 的表达量无统计学意义，但 Bax/Bcl-2 值与脓毒症组相比显著降低（P0.05）；LPS+LMWH 组较 LPS+UFH 组 Bax 的表达量显著下 降（P0.05）。 (4) 血清 sTM 和 sE-selectin 表达量检测发现，与对照组相比，脓毒症组在各时间点（6 h、 12 h 和 24 h）血浆 sTM 浓度均升高（P0.01）；LPS+UFH 组和 LPS+LMWH 组与脓毒症组 相比，在各时间点血浆 sTM 浓度均降低（P0.01），但较对照组仍有升高（P0.01）； LPS+LMWH 组与 LPS+UFH 组相比略有降低（P0.05）。从各时间点来看，脓毒症组在 6 h、 12 h、24 h sE-selectin 表达量与对照组相比仍然较高（P0.01），而在 24 h 时 LPS+UFH 组和 LPS+LMWH 组与对照组相