蛋白磷酸酶WIP1对抗病毒固有免疫的调控作用及其机制研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

杭州师范大学硕士学位论文 杭州师范大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 The role of the protein phosphatase WIP1 in antiviral innate immunity Author’s signature: Supervisor’ s signature: External Reviewers: Examining Committee Chairperson: Examining Committee Members: Date of oral defence： 杭州师范大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 杭州师范大学 或其他教育机构的 学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 杭州师范大学 有权保留并向国家有关部门 或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权 杭州师 范大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可 以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 致谢 三年光阴，转瞬即逝，硕士生生涯即将画上句点。回首求学路上的那些点点 滴滴，一路走来，有欢笑有苦闷，但我从未懊悔当初的选择。当我完成学业即将 告别校园之际，我谨向所有关心、爱护、帮助我的人们表示最诚挚的感谢与最美 好的祝愿。 首先要感谢的是我的导师史丽云教授。我认为能够成为史老师的学生是我的 毕生荣耀。一直以来，史老师在学习、工作及生活中都给了我极大的关怀和帮助。 她严谨的治学态度、开阔的思维、高度的敬业精神、正直豁达的人生态度给我留 下了难以磨灭的印象。同时也是一直是我工作、学习中的榜样以及追寻的目标。 衷心感谢史老师一直以来对我的支持、宽容和照顾。我今后唯有更加努力，才不 会辜负您对我的悉心栽培。 衷心感谢我们团队的朴正浩老师，张航老师，康艳华老师，卢哲老师，王欢 欢老师对我各项实验技术的细心指导，你们的帮助对我课题的进展起着巨大的推 动作用。 感谢我的同学王妍，毛韵，张强中在实验和生活上对我的极大帮助，也感谢 庄宁彤，丁弋娜，杨浩，王松学，赵玉芳，王冰，金素凤等师弟师妹的无私帮助。 我还要感谢父母一直默默支持我，给我前进的信心和力量。 最后，我要感谢在百忙之中评审我硕士学位论文的各位专家和所有参与答辩 的教授！ I 中文摘要 目的： 1. 通过体内外实验明确 WIP1 在病毒感染中抗病毒作用； 2. 通过体内外实验明确 WIP1 在病毒感染中对炎症的调节作用； 方法： 1. 用 VSV 病毒刺激野生型和 WIP1 敲除小鼠的腹腔巨噬细胞。通过 Western Blot 法检测 NF-κB 以及 MAPK 通路的活化情况。同时采用 Real-time PCR 以及 ELISA 法分析 IL-1β、IL-6 和 TNFα等炎症因子的表达情况，探究 WIP1 在 VSV 病毒 感染引起的炎症中的作用。 2.用 VSV 病毒刺激野生型和 WIP1 敲除小鼠的腹腔巨噬细胞，通过 Real-time PCR 和 Western Blot 法检测 RIG-I 及其下游的 TRAF3、TBK1、MAVs、IRF3、IRF7、 ISG15 和 ISG56 的表达水平和活化情况，通过 ELISA 法检测 IFNβ的表达情况。 同时，检测病毒的滴度和扩增水平。明确 WIP1 是否通过调节 RIG-I 通路产生 IFN β从而控制病毒的复制增殖。 3. 用 VSV 感染野生型小鼠，建立肺炎模型。取肺灌洗液，用 ELISA 法检测 IL-1 β、IL-6、TNFα和 IFNβ的表达水平。取肺组织研磨，用 Real-time PCR 和 Western Blot 法检测 RIG-I 和其下游的 TRAF3、NFκB、TBK1、MAVs、IRF3、IRF7、 ISG15 和 ISG56 的表达水平和活化情况。同时取肺灌洗液检测病毒滴度，分析 WIP1 敲除对小鼠病毒清除能力的影响。用高滴度 VSV 感染野生型和 WIP1 敲除 小鼠，计算小鼠死亡率，分析 WIP1 的抗病毒功能。 4. 取野生型和 WIP1 敲除小鼠的腹腔巨噬细胞，经 VSV 病毒刺激后，收取细胞 培养上清，通过 ELISA 法检测 IL-1β，caspase1 的表达