低分子柑橘果胶联合奥沙利铂对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制的分析-外科学专业论文.docx

广州医学院硕士论文低分子柑橘果胶联合奥沙利铂对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制的研究 广州医学院硕士论文 低分子柑橘果胶联合奥沙利铂对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制的研究 PAGE PAGE 10 故 MTT 实验无法顺利完成。本实验联合组 LCP 给予的浓度均为室温下所能 溶解的最高浓度 5mg/ml。 2、两组结肠癌细胞， Oxaliplatin 单药与 Oxaliplatin+LCP 联合用药各浓度组的 抑制率均有差异，具有统计学意义（P0.05）。 其中以中浓度的 Oxaliplatin 联合低分子柑橘果胶对结肠癌细胞增殖的抑制作用最好。 3、显微镜观察 IC50 剂量的 Oxaliplatin 单药及 Oxaliplatin+LCP 联合用药对 HCT116 和 HT29 细胞处理 2h 后开始出现细胞形态学改变，且随时间和浓度 增加细胞出现的凋亡特征越明显，如染色质的凝聚、细胞膜起泡、细胞核断 裂以及相关凋亡小体的出现。联合组较单药组凋亡表现更为明显，此结果与 MTT 实验结果相符。 4、采用流式细胞仪检测 IC50 剂量的 Oxaliplatin 作用于 HCT116 和 HT29 细胞 6、 24、48h 后，流式细胞仪测定凋亡细胞比例发现：与空白组相比，药物组细 胞凋亡明显（P0.05），且呈时间依赖性。各时间组之间具有统计学意义 （P0.05）。与 Oxaliplatin 单药相比，相同时间联合用药能显著增加细胞凋亡 比例，具有统计学意义（P0.05）。 5、Oxaliplatin 单用及联合 LCP 可诱导 G2／M 期细胞增加，产生细胞周期阻滞， 具有时间和浓度依赖性。联合用药组较单药组 G2／M 期阻滞更加明显，具有 统计学意义。（P0.05） 6、应用 Western blot 方法检测 6h、24h、48h 后空白组、IC50 剂量的 Oxaliplatin 单药组、Oxaliplatin+5mg/mlLCP 联合用药组 HCT116 和 HT29 细胞凋亡关键 蛋白 procaspase-3、8、9、PARP、bcl-2 的蛋白表达水平的情况。发现：单药 组与联合用药组均出现凋亡相关蛋白 procaspase-3、8、9、PARP 蛋白的表达 下调，联合组较单药组 procaspase-3、9、PARP 蛋白表达减少更加显著，两 组间 procaspase-8 表达无明显差异。与空白组相比，Bcl-2 无明显变化。 结论 1、Oxaliplatin+LCP 联合用药较 Oxaliplatin 单药对结肠癌细胞的增殖抑制作用更 加明显，以中浓度 Oxaliplatin 联合 LCP 的协同作用效果最佳。 2、Oxaliplatin 单药及联用 LCP 诱导的细胞凋亡随时间增加而增多，联合用药组 的细胞凋亡较 Oxaliplatin 单药组增加更加显著。 3、Oxaliplatin 单用及联合 LCP 可对细胞周期的 G2／M 期进行阻滞，Oxaliplatin 与 LCP 具有相同的周期阻滞时相，二者联用产生叠加效应，从而显著延长细 胞的增殖周期。 4、Oxaliplatin 单用及联合 LCP 能显著增加 procaspase-3 的活化和 PARP 的裂解， 同时活化 procaspase-8、9。与单药相比，联合用药对 procaspase-9 的活化作 用优于 Oxaliplatin 单用。 关键词：半乳凝素-3；奥沙利铂；低分子柑橘果胶；结肠癌；增殖；凋亡 Antitumor activity and its molecular mechanism of LCP in combination with Oxaliplatin in colon cancer cell lines Name：Feng Wang Supervisor: Professor Haiying Liu Major：Surgery Abstract Background Colon cancer is one of the most common malignant tumors in digestive tract. In recent years, with the improvement of living standards, lifestyle and diet changes, the morbidity rate increased year by year, its incidence ranked NO.3 among all of tumors in our country and its clear upward trend. More note worthy is that