抵抗素与CD40在血栓性疾病中的关联内科学(心血管内科)专业论文.docx

汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 摘 要 背景 血栓性疾病包括（急性心肌梗死、动脉粥样硬化、深静脉血栓等）已成为威胁全人 类健康的首要因素之一。其致死、致残率均极高。经研究证实，血管内皮功能障碍、凝 血、纤溶系统功能失调是引起血管内血栓形成的重要病理过程。抵抗素（Resistin）为 新近发现的一种脂肪细胞因子，因其具有胰岛素抵抗作用而得名。现有研究结果证实， 抵抗素的作用不仅与胰岛素抵抗、2 型糖尿病、肥胖等密切相关，而且在心血管疾病的发 生发展中也起到重要作用。经研究证实，血浆高抵抗素水平是急性心肌梗死等血栓相关 疾病的危险因素。此外，抵抗素也可促进血管内皮细胞素-1（endothelin-1, ET-1）、血 管 性 血 友 病 因 数 （ von Willebrand factor, vWF ）、 血 管 细 胞 间 粘 附 分 子 （ vascular cell adhension molecule, VCAM）等的分泌表达，造成血管内皮功能障碍，从而参与血 栓性疾病的发生与发展。 本 课 题 组 前 期 研 究 结 果 证 明 ， 在 体 外 组 织 型 纤 溶 酶 原 激 活 物 -1 （ plasminogen activator inhibitor-1）的表达在基因及蛋白水平上均产生一定影响，并进一步证实了 抵 抗 素 干 预 后 血 管 内 皮 细 胞 丝 裂 元 活 化 激 酶 （ mitogen avtivated protein kinase, MAPK）通路的启动与 PAI-1 的表达有一定的关系，初步揭示了抵抗素的细胞内作用因 素，为血栓性疾病的防治提供了新的思路及理论依据。 但目前尚未发现抵抗素的胞膜作用位点。 CD40 是Ⅰ型跨膜蛋白受体，是肿瘤坏死因数超家族的一员，B 细胞是表达 CD40 的主 要细胞，但其他细胞，如上皮细胞，成纤维细胞，血管内皮细胞，血管平滑肌细胞等也 表达 CD40。CD40L 为 CD40 的配体，通过与 CD40 的结合启动下游信号转导通路，进而引 发一系列生物效应。 近年来已被证实 CD40/CD40L 系统的启动在心肌梗死等血栓性疾病起到重要的作用。 因此 CD40/CD40L 系统也成为心血管研究领域中的热点。目前已知在参与动脉粥样斑块形 成的多种细胞中 CD40/ CD40L 高表达，但其具体作用还未阐明。现已知在动脉粥样硬化 形成的起始阶段，CD40/ CD40L 能使内皮细胞及平滑肌细胞活化并且能增强其他粘附因子 的表达。且最近研究结果表明 CD40/ CD40L 能增强在血管比重的树突状细胞与 T 淋巴细 I PAGE PAGE VI III III 胞的相互作用。CD40L 能促进颈动脉及冠状动脉粥样硬化斑块中树突状细胞的成熟和 T 淋 巴细胞的渗入，这都是使粥样斑块不稳定的特征。 且查阅文献得知，在 CD40/CD40L 系统启动后，也是通过启动 MAPK 信号转导通路进 行下游信号转导，且现有文献报导，在抵抗素的作用下内皮细胞 CD40 的表达升高。 由此本课题组成员大胆假设，抵抗素可能是通过与胞膜上的 CD40 相互作用，启动下 游信号转导通路，继而在血栓性疾病的发生及发展过程中起到一定作用。 目的 因此本实验通过体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs），观察单独抵抗素作用下，及在 CD40 抗体将 CD40 封闭前提下再加入抵 抗素作用，对 t-PA, PAI-1 表达的影响，并进一步测定 MAPK 通路活化情况进而推测 CD40 是否为抵抗素位于细胞膜上的作用位点或作用位点之一。 *本实验所采用抵抗素浓度为本课题组前期筛选出的最佳作用浓度 方法 1. HUVECs3-4 代分为单纯培养基对照组、抵抗素组（50ng/ml）、CD40 抗体组、CD40 抗 体（2ug/mg,提前孵育 0.5h）+抵抗素组培养 48 小时后，ELISA 法测各组上清中 t-PA 和 PAI-1 蛋白含量； 2. HUVECs3-4 代分为单纯培养基对照组、抵抗素组（50ng/ml）、CD40 抗体组、CD40 抗 体（2ug/mg,提前孵育 0.5h）+抵抗素组培养 48 小时后，提取 RNA 以 real time RT- PCR 法测定各组 t-PA 和 PAI-1 的 RNA 含量。 *CD40 作用时间及浓度为查阅文献所得 结果 1. 抵抗素单独作用组与 CD40 抗体+抵抗素作用组相比，在抵抗素作用 48h 后，t-PA 蛋 白表达在 CD40+抗体组较抵抗素组相比无显著变化，PAI-1 蛋