抵抗素对血小板功能的影响-心血管内科专业论文.docx

汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 中文摘要 背景 抵抗素（Resistin, Re）是一种于 2001 年新发现的具有对抗胰岛素作用的蛋白质。研究 发现抵抗素与代谢综合征（metabolic syndrome, MS）中多种炎症因子的产生分泌、动脉粥 样硬化的发生发展及血栓性疾病的发生有着密切的联系。血小板在血栓形成过程中起着不 可替代的作用，影响着血栓性疾病的发展进程，如急性心肌梗死、下肢深静脉血栓栓塞及 卒中。目前尚无研究报道抵抗素对血小板功能的调节。本实验的目的是探讨抵抗素能否改 变血小板功能及其可能涉及的信号传导通路。 方法 随机抽取 8 名健康志愿者的静脉血 3ml，制取富血小板血浆（PRP）。1）血小板活化： 富血小板血浆与不同浓度的抵抗素（25, 50, 100, 200ng/ml），单独或联合凝血酶（0.05U/ml）、 ADP（10uM）或各种通路阻滞剂，如 SB203580（10uM）,PD98059（10uM）及抗 TLR4 抗体（1ug/ml）在 37℃下孵育 15min，以荧光标记抗体 CD61-FITC 和 CD62P-PE 分别标记 全部及部分已活化的血小板，应用流式细胞仪检测血小板的活化率。2）血块回缩：富血 小板血浆与抵抗素（50ng/ml）孵育 15min，加入凝血酶（1U/ml）、CaCl2（2mmol/l）及 2ul 红细胞，37℃条件下孵育，在不同的孵育时间点（30, 60, 90, 120, 150, 180min）记录凝缩 的血块体积。 结果 1）不同浓度的抵抗素孵育后的富血小板血浆的血小板活化率均有所升高，以 50ng/ml 的抵抗素诱导的血小板活化率最高，为 48.02±7.61%，与 25ng/ml 的抵抗素诱导相比，50ng/ml 及 100ng/ml 的抵抗素组的血小板活化率更高，具有统计学意义（P=0.028 及 0.036），200ng/ml 的抵抗素组的血小板活化无统计学差别（P=0.077）。2）抵抗素（50ng/ml）与 ADP（10uM） 诱导的血小板活化率差值无统计学意义（51.74±5.2% vs 52.96±2.88%, P=0.621）。抵抗素与 ADP 联合作用后的血小板 P-选择素的表达率比单独抵抗素或 ADP 作用无明显升高 （55.51±3.91% vs 51.74±5.2%, 52.96±2.88%, P 值分别为 0.224 及 0.203）。3）抵抗素 （50ng/ml）比凝血酶（0.05U/ml）对血小板的活化作用更强（51.74±5.2% vs 45.08±2.7%, I P=0.028）。抵抗素联合凝血酶作用后血小板的活化率比凝血酶组的明显增高（45.08 ± 2.7% vs 50.41±3.59%, P=0.02）。4）与抵抗素组（50ng/ml）比较，SB203580 预处理后，抵抗素 对血小板的激活率明显降低（25.22±8.34% vs 51.74±5.2%, P0.001）。予 PD98059 或抗 TLR-4 抗 体 预 孵 育 后 ， 抵 抗 素 活 化 血 小 板 的 作 用 未 明 显 降 低 （ 51.74±5.2% vs 47.03±2.48%, 50.93±9.37%, P 值分别为 0.087 及 0.881）。5）抵抗素（50ng/ml）增加血块体积。 结论 抵抗素可通过 p38 MAPK 等通路途径调节血小板活化功能，促进血小板表面 P-选择素 表达，提示代谢综合征患者高抵抗素水平可通过激活血小板，增强血小板黏附聚集，促进 血栓性疾病发生发展。 关键词 抵抗素，血小板活化，MAPK 通路，血块回缩，血栓 II PAGE PAGE IV Abstract Background Resistin is a newly-discovered protein antagonizing insulin sensitivity. Many researches have demonstrated that it was associated with insulin resistance, inflammation, the development of atherosclerosis and thrombotic diseases in metabolic syndrome. Platelets plays an important role on thrombus growth, contributing to the development of thrombotic diseases, such as, acute myocardial infarction,