肺纤维化相关基因SP-A2突变在体外表达异常及分子机制病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 III III 缩写词 缩写词 英文全称 中文全称 SP-A Surfactant protein A 肺表面活性蛋白 A IPF Idiopathic pulmonary fibrosis 特发性肺纤维化 CRD Carbohydrate recognition domain 糖识别区 RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction 反转录多聚酶链反应 IF Immunofluorescence 免疫荧光 WB Western blot 蛋白质免疫印迹 BCA Bicinchoninic acid 二辛可宁酸 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 APS Ammonium persulfate 过硫酸铵 TEMED N,N,N,N-tetramethylethylenediamine N,N,N,N-四甲基乙二胺 TBST Tris buffered saline with tween-20 三羟甲基氨基甲烷-吐温缓 冲液 CHO-K1 Chinese hamster ovary cell 中国仓鼠卵巢细胞 β-ME β-mercaptoethanol β-巯基乙醇 NP-40 Nonyl phenoxypolythoxylethanol 壬基酚聚氧乙烯（40）醚 目录 中文摘要I Abstract II HYPERLINK \l _bookmark0 缩写词 III HYPERLINK \l _bookmark1 目录 IV HYPERLINK \l _bookmark2 第 1 章 前 言 1 HYPERLINK \l _bookmark3 第 2 章 材料和方法 4 HYPERLINK \l _bookmark4 2.1 材料 4 HYPERLINK \l _bookmark5 2.1.1 材料来源 4 HYPERLINK \l _bookmark6 2.2 主要仪器设备 4 HYPERLINK \l _bookmark7 2.3 主要试剂 5 HYPERLINK \l _bookmark8 2.4 主要溶液配制 7 HYPERLINK \l _bookmark9 2.4.1 CHO-K1 细胞培养试剂 7 HYPERLINK \l _bookmark10 2.4.2 Western Blott试剂 7 HYPERLINK \l _bookmark11 2.4.3 免疫荧光试剂 10 HYPERLINK \l _bookmark12 2.4.4 RT-PCR试剂 11 HYPERLINK \l _bookmark13 2.5 方法 12 HYPERLINK \l _bookmark14 2.5.1 质粒构建 12 HYPERLINK \l _bookmark15 2.5.2 细胞培养 17 HYPERLINK \l _bookmark16 2.5.3 Western Blot 19 HYPERLINK \l _bookmark17 2.5.4 免疫荧光 22 HYPERLINK \l _bookmark18 2.5.5 RT-PCR 23 HYPERLINK \l _bookmark19 第 3 章 结 果 28 HYPERLINK \l _bookmark20 Western Blot结果 28 HYPERLINK \l _bookmark21 3.1.1 SP-A2 蛋白CRD区突变导致蛋白分泌缺陷 28 HYPERLINK \l _bookmark22 3.1.2 突变SP-A2 蛋白不能正确折叠形成二聚体/三聚体影响蛋白分泌缺陷 29 HYPERLINK \l _bookmark23 3.1.3 突变SP-A2 蛋白不能正确折叠形成二聚体/三聚体导致蛋白唾液酸化缺陷， HYPERLINK \l _bookmark23 而不是导致N-糖基化缺陷 31 IV 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 V V HYPERLINK \l _bookmark24 3.1.4 抑制蛋白糖基化或唾液酸化不能完全封闭SP-A2 蛋白分泌 33 HYPERLINK \l _bookmark25 3.1.5 突变SP-A2 蛋白部分通过蛋白酶体途径降解而不是溶酶体途径和自噬体途 HYPERLINK \l _bookmark25 径 35 HYPERLINK \l _bookmark26 3.1.6 蛋白酶体抑制剂可以使突变SP-A2 蛋白在胞内积聚