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基因工程构建表达融合蛋白GST—FCoAT的
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基因工程构建表达融合蛋白GST—FCoAT的
益生大肠杆菌EcN—Frc
赖德辉李逊 雷鸣 曾国华袁坚昊文起何永忠何朝晖
摘要 目的：将产甲酸草酸杆茵代谢草酸基因Frc克隆至表达载体PGEX．4T．2。转化大肠杆菌
EcN，稳定表达甲酰辅酶A转移酶。方法：采用PCR方法从产甲酸草酸杆菌基因组中获得Frc基因，
析。结果：EcN．Frc可稳定表达可溶性融合蛋白GST．FCoAT。结论：改造后的EcN能诱导表达甲酰辅酶
A转移酶，将为下一步体内外代谢草酸实验和临床治疗高草酸尿和防治草酸结石的益生茵制剂的研
’
究奠定基础。
关键词草酸杆菌科； Frc； 基因克隆； 大肠杆菌Nissle
Constructionof EscherichiacoilNissle·-Frc GST-FCoATfusion by
probiotic expressed proteingenetic
engineering从IDe—hui，LI Guo·hua，YUANJkm，WU
Xun，LEI施增，ZENG Wen-qi，HEYong-zhong，
HE Medical
Zhoo-hui．Gan缈an College，Guang：hou510700，China
Hospital，Guangzhou
Correspondingauthor：LEI胁增E—mail：lmlm．1eiming@163．com
Toclone Frcofoxalobacter vector
【Abstract】Objective oxalate-degredationgene formigenes(OF)into
E．coli
PGEX一4T一2，andstablyexpressFormyl-CoAtransferase(FcoAT)inprobioticNissle(EcN)．Methods
GeneFrowas PCRandverified itwasextractedandinsertedintothe
amplifiedby bysequencing，then
vector therecombinant PGEX-4T-2-Frcwas
PGEX一4T一2：
prokaryoticexpression finally expressionplasmid
transformedintoEcNandinducedto theGST-FCoATfusion withIPTG．TheWas
express protein product
identifiedand Westemblot．ResultsGST-FCoATfusion was inEcN—Frc．
analyzedby proteinstablyexpressed
ConclusionsThealteredEcNcanbeinduced
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