兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽PⅠCP酶联免疫分析ELISA.docVIP

兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽（PⅠCP）酶联免疫分析（ELISA） 兔子?型前胶原羧基端肽(P?CP)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的,本试剂盒用于测定兔子血清,血浆及相关液体样本中?型前胶原羧基端肽(P?CP) 的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔子?型前胶原羧基端肽(P?CP) 水平。用纯化的兔子?型前胶原羧基端肽(P?CP) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入?型前胶原羧基端肽(P?CP) ，再与HRP标记的?型前胶原羧基端肽(P?CP) 抗 底物TMB显色。TMB在HRP体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的?型前胶原羧基端肽(P?CP) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中兔子?型前胶原羧基端肽(P?CP) 浓度。 试剂盒组成: 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片(48) 2片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8?保存 标准品:2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8?保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8?保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8?保存 浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8?保存 注意事项: 1( 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 2( 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 3( 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4( 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 5( 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值 1 大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 6( 底物请避光保存。 7( 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8( 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9( 本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离心。 3. 尿液:用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞 浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分 钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8?的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待 检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样 品最终稀释度为5倍)。加样