化学诱变法选育片球菌素高产乳酸片球菌菌株的研究-食品科学专业论文.docxVIP

独创性声明 喇喇喇lW跚 Y1874 崎U 本人声明所呈交的学位论文是本」、在导师指导下进行的研究工作和取得 的研究成果，除了文中特别加以栋注来臼致谢之处外，论文中不包含其他人已经 发表或撰写过的研究成果，也不包含均获得天津大学或其他教育机构的学 位或证书而使用过的材料。与我…同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 、‘ 学位论文作者签名:树 签字日期: 川10 年 6 月 10 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津大学 有关保留、使用学位论文的规定。 特授权天津大学可以将学位论文的全部成部分内容编入有关数据库进行检 索，并采用影印、缩印成扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学 校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。 (保密的学位论文在解密后适用本报权说明) 飞. ‘r -， -， 、..- ‘  学位论文作者签名:及iJ 签字日期: ).心10 年 6 月 10 日 导师签名=肉也;总 签字日期:刘 0 年 6 月/乡日 ，.. .嗣‘ .-- ‘一- .， _ 3 3 摘要 乳酸雨细菌素是食品级微生物的代谢产物，有些已作为食品防腐剂用于食 品保藏。片球菌紫 (pediocin) 是既 nisin 以来最有可能投入生产的乳酸菌细菌 素，但由于片球商素产生商多为野生商株，产量低下的缺点给研究带来不便， 无法满足工业生产的要求。本研究是以本研究室从国内发酵食品中分离出的乳 咱 酸片球菌 (Pediococω acidilactici) PA003 为研究对象，通过化学复合诱变的 方法进行诱变育种，以期获得商产片球菌素的突变菌株，适用于今后的实验室 ? 研究和工业生产。 为快速准确测定片球商索效价，本研究采用了三种片球菌素效价测定和定 量的方法:质量称重法，用于规模化生产过程中片球菌素产量测定:牛津杯双 层平板法，测定结果较准确，用于突变菌株的初筛过程:分光光度法，测试时 间短，主要用于高产片球菌素菌株最适生产条件探索过程。 本研究采用硫酸二乙醋和LiCl 复合诱变的方法对片球菌 PediococlαIS acidilactici PA003 进行诱变育种。正交试验确定 DES 最佳诱变条件为片球菌菌 液浓度为 107cfu/mL， DES 浓度为 0.8% ，诱变时间为30min，诱变温度为37.C ， 试验中共获得 20 个片球菌素产量提高的突变菌株。挑选产量提高幅度最大的五 株继续进行 LiCl 诱变商种试验，从中进一步筛墙出 5 株产最提高的突变菌株， 其中突变菌株凹的效价为商株 Pediococcus acidilactici PA003 效价的 24.15 倍。 本研究进而对影响上述突变菌株凹产片球菌素的因素进行了研究。通过单 因素试验确定培养基初始 pH 值、接种最、培养温度、培养时间为主要影响因 素:运用 Design Expert 7.1.6 中的 Box-Behnken 设计法，得到回归方程的预测模 型并进行响应面分析，确定突变菌株 P2 产片球菌素最适生产条件为初始 pH 值 6.5、培养时间17.5h、初始温度37t 、接种量0.5% 。此条件下培养突变菌株 凹，其效价是普通条件下突变菌株 P2 产片球菌素效价的1.12 倍。 突变菌株P2经过20代的连续斜面传代试验，片球菌素产量保持稳定，第 20 代产片球菌素效价下降 2.3%左右，遗传稳定性良好。 (旨 片球菌素具有被开发为安全和高效生物食品防腐剂的巨大潜力，本研究获 得的高产片球菌素突变菌株 P2 有望用于片球菌素的工业化生产，并取得良好的 经济和社会效益。 关键词z 片球商素乳酸片球菌化学复合诱变 ‘} 4 4 ABSTRACT Bacteriocins produced by lactic acid bacterias are metabolited products of food-grade microorganisms ，and nowadays some of them are used for food pres町vation. Pediocin is 由e most likely to put into production since nisin. However， its negative ωstudy about pediocin because the bacterias producing pediocin are 、‘ wild stains which have low yields that cant meet the r，叫uirement of indust