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禽流感（H5、H9亚型）二价油乳剂灭活疫苗试验研究 一 25一 文章编号:1005—944X(2oo5)o4一oo25—03 禽流感(H5,H9亚型)二价油乳剂灭活疫苗试验研究 李明义范根成杜元钊张文学 (农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司研发中心山东青岛266032) 摘要:本品系用A型禽流感病毒A/Ostrich/Denmark/72420/96(LPAI—H5N2)株及A/Chicken/Shanghai/1/98 (H9N2)株分别接种易感鸡胚,收获感染胚液,超滤浓缩后经甲醛溶液灭活,加油佐剂混合乳化制成的油乳剂灭 活疫苗.疫苗用4周龄SPF鸡作安全试验,每只鸡肌肉注射2nd,结果表明试验鸡均无全身症状和局部病变,证 明疫苗安全性良好.取疫苗一羽份免疫4周龄SPF鸡作效力检验,免疫鸡全部获得保护,对照鸡全部感染或死 亡.经不同免疫剂量测定,证明一羽份疫苗中至少含有8个免疫剂量.免疫干扰试验证明两种抗原具有免疫协 同作用. 关键词:禽流感.二价灭活疫苗,疫苗检验 禽流感(AJ)是由A型流感病毒 引起的一种禽急性,接触性,烈性传 染病.病毒广泛存在于野生禽,鸟 类和人工饲养的禽类中,国际兽医 局(ore)将其列为动物的A类传染 病.1878年,该病首次在意大利暴 发流行,当时称之为鸡瘟.禽流 感引起的损失主要有:高致病力毒 株致鸡只的大量死亡;非高致病力 毒株引起产蛋量下降,免疫功能障 碍而继发细菌或病毒的感染.1994 年,我国广东首次报道分离H9N2 亚型禽流感病毒,此后中国大陆的 禽流感日益受到世人的关注.根据 临床实践和已有的报道,近几年, H9N2亚型禽流感病毒已成为中国 大陆当前禽流感病毒的主要亚型, H9N2亚型禽流感病毒除引起上呼 吸道症状,产蛋量严重下降外,个别 毒株还可引起较多的死亡.由H5N1 亚型引起的禽流感在中国的报道最 早见于1997年香港,死亡率极高, 对鸡的危害十分严重,20O4年初在 我国大面积爆发,现已几乎遍及全 国各地.因此,对这两种亚型禽流 感的防制已成为当前禽病防制工作 的首要任务.实践表明,疫苗免疫 是防制爆发的主要措施,关键环 节和最后防线.目前,国内外用于 预防MV的疫苗均为H5,H9亚型 单相灭活苗,使用起来费时,费工, 1)东营市利津县北岭乡畜牧兽医站 且对免疫鸡产生较大的应激,为了 使用方便,减少对鸡的应激,在广泛 开展禽流感疫情调查和病毒分离的 基础上,针对我国禽流感的流行状 况,我们进行了H5,H9亚型禽流感 二价油乳剂灭活苗的研制工作,现 将主要研究成果报告如下. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1毒种来源,培育及鉴定 制造本品用的A型禽流感病 毒A/Ostrich/Denmark/72420/96 (LPAI—H5N2)株(简称D96株)毒 种由农业部动物检疫所从英国卫桥 中心兽医实验室引进;A型禽流感 病毒A/Chicken/Shanghai/1/98 (H9N2)株(简称F株),由农业部畜 禽传染病学重点实验室和农业部动 物检疫所分离(中国预防医学科学 院病毒学研究所国家流感研究中心 鉴定),保存和供应;效检用A型禽 流感病毒A/Chicken/Guangdong/1/ 01(}{I—H5N1)株(简称GD株), 由农业部动物检疫所分离(中国预 防医学科学院病毒学研究所国家流 感研究中心鉴定),保存和供应. 1.1.2试验用鸡胚及鸡 SPF胚:SPF种蛋购自济南斯 帕法斯SPF鸡场,在本所实验动物 室孵化;SPF鸡:将购回的SPF种蛋 在本所实验动物室孵化,出雏,饲 养.饲料经c照射消毒;饮用水为 经过煮沸的常水. 试验用非免疫鸡及鸡胚:种蛋 购自青岛康信种鸡场,在青岛易邦 生物工程有限公司兽用灭活苗生产 车间的实验动物室孵化,饲养. 1.1.3实验动物房及隔离器 健康SPF鸡饲养及免疫试验在 易邦生物工程有限公司兽用灭活苗 生产车间3号实验动物房(普通动 物房,该动物房通过农业部实验动 物管理委员会验收)进行. 攻毒试验在易邦生物工程有限 公司兽用灭活苗生产车间3号实验 动物房(强毒动物房,该动物房通过 农业部实验动物管理委员会验收) 进行. LSL一Ⅲ型硬式不锈钢负压禽 用隔离器,由黑龙江灵农科技开发 有限责任公司制造,所有SPF试验 鸡均在不同动物房内的负压禽用隔 离器内饲养. 1.1.4禽流感油乳剂灭活苗生产 用设备及试剂由青岛易邦生物工 程有限公司禽流感油乳剂灭活苗生 产车间提供. 1.2方法 1.2.1抗体及EIDso检定方法AI m测定方法参照中华人民共和国 兽用生物制品质量标准以下简称 标准附录318页.ElDso的测定参 照标准附录314页. 1.2.2制苗用病毒液的制备及检 CHINESEJOURNALOFANIMALQUARA_