环境和遗传因素导致男性不育分子机制的相关研究-妇产科学专业论文.docxVIP

复旦大学医学院博士毕业论文中文摘要 复旦大学医学院博士毕业论文 中文摘要 有性生殖中，胚胎的形成始于精卵结合。由于哺乳动物精卵细胞体积的悬殊 及精子发生、成熟过程中特有的形态及细胞成分的变化，长久以来广泛认为在受 精及胚胎早期发育过程中，精子仅仅提供受精所需的雄性来源DNA。随着近年对 精子生殖功能的深入探索，已有迹象表明精子DNA和RNA在男性生育功能方面 可能存在同样重要的调控作用。为研究精子DNA和RNA对男性生育功能及其进 行辅助生育技术的影响，进行了下列研究： 应用精子染色质结构完整性检i贝!j(SCSA)的方法检测育龄男性精子DNA损伤， 指标分别为DNA碎片指数(DFI)和高DNA着色性(HDS)，探讨吸烟对育龄男性精 子质量，尤其是精子DNA损伤的影响。该研究发现吸烟920支／日和吸烟年限≥10 年的患者组精液量、前向运动精子比例低于且精子畸形率显著增高(尸O．05)； 吸烟组与非吸烟组相比， 平均DFI(II．6±8．9％VS 9．3±8．4％)和HDS值 (13．6±11．2 VS 7．8±9．1％)均有上升(KO．05)。提示吸烟≥20支／日和吸烟年 限≥lO对精子DNA完整性和核成熟度有不良影响。 比较精子DNA不同损伤程度对各项辅助生育技术治疗结局的影响。将DFI正常 阈值设为≤27％，HDS正常阈值设为≤15％。按以下标准分别分组比较，组1为DFI ≤27％且HDS≤15％，组2为DFI27％且liDS≤15％，组3为DFI≤27％且HDS15％，组4 为DFI27％且HDS15％。IUI治疗周期中，与组I相比，组2和组3患者妊娠率有降 低趋势，但各组比较妊娠结局未达到统计学意义；ROC(受试者工作曲线)显示 DFI20．6％或HDS35．5％时，进行IUI治疗获得妊娠的可能性5％。 精子DFI27％的男性进行IVF助孕时，受精率、可用胚胎率和新鲜周期移植 后妊娠率没有明显降低，但优质胚胎率明显下降；其day3的胚胎碎片程度增加。 精子HDS15％的男性进行ICSI助孕时，受精率低于正常组男性，但其可用胚胎率、 优质胚胎率及新鲜周期移植后妊娠率没有明显降低。三种方式中精子DFI和lIDS 指标同时异常者均未获得妊娠，提示DFI和HDS联合指标对男性生育力的预测价值 可能更大。 通过对人精子RT—PCR的研究表明，精子细胞特异表达的新基因hssp41 l在 男性精子mRNA中存在多态性，两种异构体在不同男性精子中的表达存在差异， 约有90％的男性精子mRNA中有异构体5的表达：仅有i0％的男性基因异构体5缺 复旦大学医学院博士毕业论文失表达：两种异构体在同一男性精子中的表达量也存在差异，异构体5占主导，其 复旦大学医学院博士毕业论文 失表达：两种异构体在同一男性精子中的表达量也存在差异，异构体5占主导，其 mRNA表达量大大高于异构体4；hssp41 1基因组体外重组表达研究发现，尽管 hssp41 1 mRNA有两种异构体存在，但最后的蛋白表达仅有一种(异构体5的表 达产物)，因此精子mRNA中是否有异构体5的表达可能是男性不育的一个分子标 志，可为男性不育的病因诊断提供新的思路。 原发性纤毛运动障碍(primary ciliary dyskinesia，PCD)是一种基因突变 造成的纤毛运动障碍性疾病。患者精液表现无或极少活动精子，须借助ICSI技 术获得后代，但其受精率很不稳定。我们通过透射电镜诊断7例PCD男性，均存 在纤毛超微结构异常；通过热点基因测序，寻找突变位点，发现5例PCD患者在 编码外动力臂的DNAH5基因中存在相同的突变位点248315G—C，这是国内外尚 未报道的；对8个ICSI周期的妊娠结局和精子质膜完整性及精子来源的相关性 进行分析。 4个周期使用自然射精，3个周期使用TESA精子，还有1个周期同时采用自然 射精和TESA精子进行授精。8个周期总共获得成熟的MII卵子73枚，平均受精率为 46．6％(34／73)。所有ICSI周期都获得了至少1枚可用胚，但只有5个周期有优质 胚胎，其中有3个周期获得了临床妊娠。因此，我们认为，ICSI是目前治疗PCD 伴男性不育患者的唯一有效的方法且PCD患者精子质膜完整性可能与其ICSI治疗 结局相关，精子质膜完整性检测可以实现对PCD,患者的初筛，有可能发展成为PCD 患者精子质量评价的常规方法，用来预测PCD患者ICSI治疗的成功率。 关键词：DNA：损伤，辅助生育技术，宫腔内人工授精，体外受精，单精子胞 浆内显微注射，基因表达，原发性纤毛运动障碍 4 复旦大学医学院博士毕业论文Abstract 复旦大学医学院博士毕业论文 Abstract In sexual reproduction，embryo is origina