环孢霉素A和他克莫司抑制小鼠心脏移植免疫反应中4-1BB分子的表达及其机制研究-外科学专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文环孢霉素^和他克莫司抑制小鼠心脏移植免疫反应中 浙江大学博士学位论文 环孢霉素^和他克莫司抑制小鼠心脏移植免疫反应中 4—1 BB分子的表达及其机制研究 2001春博士研究生： 万云乐 导 师： 郑树森院士 浙江大学医学院附属第一医院肝胆外科、卫生部多器官联合移植研究重点实验室，杭州，310000 (中文摘要) 前 言 移植技术的改进、UW液和新型免疫抑制剂的研发和应用以来，临床器官移植的长期存活率得 到明显提高，并已成为终末期器官功能衰竭病人的最佳治疗方案。然而，同种异体排斥反应仍然 是器官移植的主要障碍。而且临床器官移植患者几乎无一例外地要长期、正规地应用免疫抑制剂。 同种异体排斥反应的实质是T细胞活化。经典移植免疫学理论认为，T淋巴细胞的活化需要两个 信号。信号l为抗原递呈细胞(Antigen presenting cells，APC)表面的主要组织相容性抗原／外源 性抗原复合物(瑚c／Ag complex)，与T细胞表面的T细胞受体／CD3复合物(TCR／CD3 complex) 相结合：信号2为APC或B细胞表面的共刺激抗原分子与其配体的相结合(共刺激通路)。在共 刺激通路中，起主要作用的是B7一CD28或CTLA4和CD40-CDl54信号途径。CTLA4在T细胞活化后 迅速上调表达，并对T细胞起负性调节作用。研究表明，如果缺乏共刺激信号，TCR介导的抗原信 号刺激会导致T细胞无能，T细胞无法分泌IL-2，即T细胞无法进入活化、增殖阶段。 尽管大量的证据表明，CD28分子在启动T细胞免疫反应中提供了关键的共刺激信号，然而并 非所有情况下T细胞活化都依赖于B7一CD28信号。研究表明，CD28“_，J、鼠仍能对同种异体移植皮 肤发生排斥反应。阻断CD40一CDl54交联也不能完全抑制同种异体小鼠心脏移植排斥反应。近年 来研究表明，CD8+T细胞不依赖CD28或CDl54提供的共刺激信号仍可以继续得以活化。说明在T 细胞的活化中还可能存在其他共刺激分子或共刺激信号途径。 4-IBB是CD4+、CD8+T细胞表面的一种I型膜表面糖蛋白分子，属于肿瘤坏死因子受体超家 族成员，在T淋巴细胞活化过程中发挥着协同刺激作用。4-IBB分子仅表达于活化的T细胞和NK 细胞表面，在静止T细胞表面不表达。其配体4-IBBL分子则表达于活化的APCs包括DCs表面。 4-18B与其配体分子4-IBBL的交联在维持T细胞活化和放大T细胞毒性效应中发挥重要的作崩。 浙江大学第一附属医院 浙江大学博士学位论文研究表明，活化T细胞在反复的抗原刺激下CD28分子表达下调，并容易发生T细胞活化后凋亡 浙江大学博士学位论文 研究表明，活化T细胞在反复的抗原刺激下CD28分子表达下调，并容易发生T细胞活化后凋亡 (activation induced cell death，AICD)。而在TCR提供抗原刺激信号下，4-IBB足以提供T 细胞所必需的共刺激信号或协同CD28分子的共刺激信号，维持T细胞活化状态，抑制AICD的发 生。最近的研究表明，在缺乏CD28信号的条件下，4-1BB同样可以诱导T细胞的大量增殖和IL_2 的上调表达。动物实验则表明，应用抗4-IBB单克隆抗体可以极大地刺激CD8+T细胞的增殖并 激发同种异体移植排斥反应，说明4-IBB途径是细胞免疫应答过程中的一个重要的共刺激信号途 径。 4-IBB分子并不象CD28分子一样结构性地表达于T细胞表面，本研究应用小鼠腹腔内异位心 脏移植模型，通过应用病理学、RT-PCR、Western blot、EMSA、ELISA、免疫荧光、激光共聚焦 和流式细胞技术等免疫学及分子生物学实验技术手段，探索4-1BB分子途径在同种异体移植物急 性排斥反应中的表达情况及其意义。同时探索免疫抑制剂环孢霉素A(Cyclospodne A，CsA)和 他克莫司(Tacrolimus，FKS06)。能否有效地抑制异基因小鼠心脏移植排斥反应时T细胞的4-IBB 分子表达及其可能的机制。 材料与方法 C57BL／6和Balb／c小鼠作为移植供体，Balb／c小鼠作为移植受体，建立小鼠腹腔内异位心脏 移植模型。按移植前后处理方法不同，随机分为4组：A组为Balb／c-Balb／e同基因对照组，移植 前后未作处理；B组为C57BL／6-Balb／e急性排斥组，移植前后未作处理；C组为C57BL／6．BMb／e 异基因移植CsA细_(C57BL／6-Balb／c+CsA)，移植日开始给予环孢霉素A(CsA)10．Omg·k一·d_1 腹腔注射×14天；F组为C57BL／6-Balb／e异基因移植FK506组(C57BL／6．Balb／e+FK506)，移植 日开始给予他克莫司(Tacrolimus，FK5