血管内皮生长因子165基因修饰的人脂肪间充质干细胞-兰州大学学报.PDF

第41 卷 第3 期 兰州大学学报（医学版） Vol.41 No.3 2015 年6 月 Journal of Lanzhou University （Medical Sciences ） Jun. 2015 文章编号：1000-2812 (2015) 03-0036-08 血管内皮生长因子165 基因修饰的人脂肪间充质 干细胞与改性丝素蛋白体内构建血管化 组织工程脂肪的研究 亢 婷，王 刚，刘 毅，刘刚强 兰州军区兰州总医院 全军烧伤整形外科中心，甘肃 兰州 730050 摘要：目的目的探讨血管内皮生长因子165 （VEGF 165）基因修饰的人脂肪间充质干细胞 （hADSCs ）与壳聚糖修饰的丝素 蛋白支架材料体内构建血管化组织工程脂肪的可行性。方法方法分离提取hADSCs ，选取生长状态良好的第3 代hADSCs ， 用携带重组人VEGF 165基因的慢病毒进行感染 （感染复数=50）。选用慢病毒感染和未感染的第3 代hADSCs 分别接种 于支架材料上，记为实验组与对照组，同时成脂诱导5 d 后，使用氯甲基苯甲酰胺标记细胞。取24 只雌性Wistar 大鼠， 将上述实验组与对照组细胞—支架复合物移植于背部皮下，每组12 只。移植后8 ，12周分别取材并行冰冻切片、HE 染 色、油红O 染色及扫描电镜，同时观察支架材料的降解情况，观察移植物。免疫印迹法检测VEGF 165及过氧化物酶体 增殖体激活受体-γ 2 （PPARγ-2 ）蛋白的表达。结果结果移植后8 ，12 周，免疫印迹法结果显示实验组移植物均表达 VEGF 165，对照组未见表达；实验组与对照组均表达PPARγ-2 ，实验组中的表达量明显多于对照组 （P 0.05 ）。扫描电 镜、油红O 染色及HE 染色均表明实验组与对照组生成大量脂肪样细胞，且实验组明显多于对照组 （P 0.05 ）。结论结论携 带重组人VEGF 165 基因的慢病毒感染的hADSCs 与壳聚糖/丝素蛋白支架材料复合物在大鼠体内可持续表达VEGF 165及 PPARγ-2 蛋白，能显著促进工程化脂肪组织的构建，为血管化组织工程脂肪的构建奠定了基础。 关键词：组织工程脂肪；血管内皮生长因子165；人脂肪间充质干细胞；壳聚糖；丝素蛋白；支架 中图分类号：R363 文献标识码：A doi ：10.13885/j.issn. 1000-2812.2015.03.008 Study on constructing vascularized tissue engineered dipose utilizing VEGF 165 gene modified human adipose derived mesenchymal stem cells with chitosan-surface modified silk fibroin scaffolds in vivo Kang Ting, Wang Gang, Liu Yi, Liu Gang-qiang Center of Burns and Plastic Surgery of PLA, Lanzhou General Hospital of Lanzhou Military Command, Lanzhou 730050, China Abstract ：：Objective To explore the feasibility to construct vascularized tissue engineered adipose with human adipose-derived mesenehymal stem cells (hADSCs) modified by human vascular endothelial growth factors 165(VEGF165) gene and a novel 3-D silk fibroin scaffold modified by chitosan (CS/SF) in vivo. Methods Isolated, cultured human adipose derived stem cells to the third generation(P3 hADSCs), then infected the cells with lentivirus vect