环境镉致急性肾损伤与槲皮素保护作用的分子生物学研究-环境工程专业论文.docxVIP

Classified Index: Q71 U.D.C.: 577 Dissertation for the Doctoral Degree in Engineering THE MOLECULAR BIOLOGICAL RESEARCH ABOUT THE PROTECTIVE MECHANISM OF QUERCETIN IN ACUTE RENAL INJURY INDUCED BY CADMIUM Candidate: Supervisor: Associate Supervisor: Academic Degree Applied for: Speciality: Affiliation： Date of Defence: Degree-Conferring-Institution: Wu Hongchi Prof. Yang Qian Prof. Yang Baofeng Doctor of Engineering Life Science and Engineering Environmental Engineering December, 2007 Harbin Institute of Technology 摘要 - I - 摘要 镉（cadmium, Cd）是一种极其重要的工业和环境化学污染物具有较强 的毒性，近年来，镉的消费模式发生了改变，由原来多用于电镀，改为广泛 应用于电池业和电子业，使其回收困难，镉污染地区增多，又由于镉在环境 中不能生物降解，在体内半衰期长达10-30年不易排除，故易损伤许多组织 和系统，肾脏是镉的主要排泄器官，也是最重要的蓄积部位和靶器官。目前 还没有治疗镉致肾损伤的有效方法。 根据既往的研究报道，选择了 2、3、4、5、7、9、11mg/kg 的氯化镉单 次腹腔注射后，对 1、3、5d 肾损伤指标、光镜下肾脏病理学改变、尿金属 硫蛋白（MT）、大鼠一般状态、死亡情况及尿量进行了研究及评价。结果表 明，镉能够导致急性肾损伤，损伤程度有随着镉剂量增加而增加的趋势，镉 的剂量过大会出现大鼠短时间死亡，可能与镉引起其它脏器的衰竭有关，镉 的剂量 4mg/kg 可用于槲皮素对镉致急性肾损伤保护作用的研究。 槲皮素（Quercetin, QU, 3, 3′, 4′, 5, 7 -五羟基黄酮）预防性研究中，首先 预防性应用槲皮素30d后，再予以氯化镉4mg/kg致镉急性肾损伤；槲皮素治 疗性研究时，首先予以氯化镉4mg/kg致急性肾损伤后，再予以槲皮素30d； 预防组于33、35、37d及治疗组于10、20、30d分别进行尿量、肾损伤指标、 尿金属硫蛋白测定，研究大鼠一般状态、肾组织病理学改变。结果表明，槲 皮素对镉致急性肾损伤具有一定的预防作用，此作用不具有时间依赖性；槲 皮素对镉致急性肾损伤具用一定的治疗作用，此作用有随着槲皮素剂量增加 而增加的趋势，但无时间依赖性。 采用蛋白免疫印迹（ Western-blot ）检测技术，对槲皮素预防组大鼠 33、35、37d 及治疗组大鼠 10、20、30d，肾组织一氧化氮合酶（eNOS）的 蛋白表达进行定性及定量分析。结果表明，eNOS 蛋白表达在镉致急性肾损 伤槲皮素预防组及治疗组中均明显增加，且蛋白表达有随着槲皮素剂量增加 而增加的趋势，但治疗及预防作用均不具有时间依赖性。说明 eNOS 参与了 槲皮素对镉致急性肾损伤的预防和治疗作用，提示槲皮素对镉致急性肾损伤 的保护作用可能与槲皮素抑制了镉诱导的氧化应激反应有关。 采用 Western-blot 检测技术，对槲皮素预防组大鼠 33、35、37d 及治疗 组大鼠 10、20、30d，肾组织环氧合酶-2（COX-2）的蛋白表达进行定性及 定量分析。结果表明，COX-2 蛋白表达在镉致急性肾损伤槲皮素预防组及 哈尔滨工业大学工学博士学位论文 - II - 治疗组中均明显降低，且蛋白表达有随着槲皮素剂量增加而降低的趋势，但 治疗及预防作用均不具有时间依赖性。说明 COX-2 参与了槲皮素对镉致急 性肾损伤的预防和治疗作用，提示槲皮素对镉致急性肾损伤的保护作用可能 与槲皮素抑制了镉诱导的微炎症反应有关。 采用 Western-blot 检测技术，测定对照组、镉组、槲皮素组丝裂素活化 蛋白激酶（p38MARK）的蛋白表达。结果表明，p38MARK 可能参与了槲 皮素对镉致急性肾损伤的保护作用。 选择 p38MAPK 的特异性抑制剂 SB203580，探讨在槲皮素对镉致急性 肾损伤保护作用中 P38MARK 信号通路是否参与了 COX-2 蛋白表达，采用 Western-blot 检测技术，对比了应用 p38MAPK 的特异性抑制剂 SB203580 前 后，对照组、镉组、槲皮素治疗组 C