高分子量透明质酸发酵工艺的研究-发酵工程专业论文.docxVIP

Classified Classified Index：!Q2垫 Secrecy Rate：Publicized UDC：663 University Code：10082 Hebei University of Science and Technology Dissertation for the Master Degree Study on Fermentation Process of High—molecular—weight Hyaluronic Acid Candidate： Li Zhimin Supervisor： Prof．Zhao Guoqun Associate Supervisor： Academic Degree Applied for： Master of Engineering Speciality： Fermentation Engineering Employer： College of BioscienceBioengineering Date of Oral ExaminatiOil： May29，2015 万方数据 ；．-7j ；．-7j k科技大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方 式标明。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发 表或撰写过的作品或成果。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：孪磐饮 指导教师签名．毫 郴年㈧8 B uf≤年l具f口日 河北科技大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权河北科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 口保密，在一年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 诉保密。 (请在以上方框内打“√”) 学位论文储签名．孽乏、钷殳 导 蝴师 氢 砷 ZJ心年f月p日 山Ⅳ 签rJ 年 奇协 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 透明质酸(Hyaluronic acid，HA)是由葡萄糖醛酸与N．乙酰氨基葡萄糖组成的双 糖单位重复连接而成的微生物多糖，作为一种生物高分子聚合物，透明质酸由于其 自身的优良特性，在医药、化妆品、食品保健等领域得到广泛研究与应用。分子量 显著影响透明质酸理化特性与应用效果。高分子量HA(Mr2×106Da)一般应用于医 药领域，而低分子量HA(MrI×106 Da)一般应用于化妆品和食品领域。通常，分子 量越高，价格越高。 微生物发酵法是目前透明质酸的主要生产方法，本研究以Streptococcus zooepidemicus为发酵菌株，通过考察营养条件、培养条件以及细胞膜通透性对透明 质酸发酵的影响，筛选出透明质酸分子量的显著影响因素，并将其进行优化组合， 最终获得高产量和高分子量统一的发酵工艺。本论文主要研究内容如下： 第一，基于透明质酸代谢途径的特性，先后考察了碳源、氮源、多聚磷酸盐、 丙酮酸钠对透明质酸分子量的影响。结果发现：采用分批培养的方式同时保持较高 水平的葡萄糖(70 g／L)供给，可以有效缓解菌体生长与透明质酸合成对于共用资源 ．葡萄糖的竞争，有利于高分子量透明质酸的合成，透明质酸分子量最高可达1．63 MDa；提高有机氮源酵母粉的浓度(起始水平lOg／L)以及流加氨水均不利于高分子 量透明质酸的合成；向透明质酸发酵体系中添加较高聚合度的多聚磷酸盐((NaP03)6) 可以弱化菌体生长与透明质酸合成的能量竞争，当(NaP03)6添加量为3 g／L，分子量 最高可达2．27 MDa；较高浓度的丙酮酸钠可以显著减弱糖酵解与透明质酸合成途径 对共用资源的竞争，促进高分子透明质酸的合成，当其添加量为8 g／L时，分子量最 高可达2．14 MDa，将上述营养强化策略组合应用于透明质酸的发酵，最终产量和分 子量分别达到5．58 g／L和2．35 MDa，比优化前各自提高了20％和44．2％。 第二，从pI-I、温度、通气和搅拌速率四个方面考察了培养条件对于透明质酸分 子量的影响。pH和温度显著影响透明质酸产量和分子量，当pH=7时，透明质酸产 量最高，达到4．71 g／L，当pH=8时，透明质酸分子量最大，达到2．28 M．Da，：当温 度在37℃条件下时，透明质酸产量最高，当温度在31℃时，透明质酸分子量最大， 达到2．34 MI)a；通气和搅拌速率显著影响透明质酸产量和分子量，当搅拌速率为600 rpm，通气速率为1