高GC模板扩增优化及纳米金作用机制初探-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

additives, AuNPs could also help to improve the amplification of relatively longer GC-rich template. However, AuNPs didn’t show obvious advantages when compared with TAKARA’s commercialized reagents. Besides, this article tried to understand the mechanism of AuNPs by studying the cause of smear bands in reamplification PCR systems. And these phenomena were thought to be caused by two reasons. First, complex secondary structures formed between products led to the artifacts in electrophoresis. Second, nonspecific amplification occurred due to some partially synthesized target fragments’ mispriming. According to these results and the above hypothesis, the mechanism of AuNPs’ improving specificity in reamplification PCR system was probably to inhibit the nonspecific priming events. It was also discovered that DNA polymerase had the strongest affinity for AuNPs in PCR systems through further experiments. Thus, probably AuNPs inhibit nonspecific amplification by interacting with DNA polymerase. KEY WORDS: nanoparticles PCR, amplification of GC-rich templates, reamplification 目录 第一章 绪论 6 HYPERLINK \l _TOC_250003 1.1 PCR 技术介绍 6 HYPERLINK \l _TOC_250002 1.2 一般 PCR 体系优化 8 HYPERLINK \l _TOC_250001 1.3 高 GC 模板扩增的优化 10 1.3.1 添加剂的选择10 1.3.2 改良 PCR 程序介绍 12 HYPERLINK \l _TOC_250000 1.4 纳米金在 PCR 中的应用 13 1.5 关于本论文 15 第二章 关于纳米金在高 GC 模板扩增中应用的初探 16 2.1 引言 16 2.2 实验材料与方法 16 2.3 实验结果 18 2.3.1 基于 Pfu DNA 聚合酶的高 GC 模板扩增体系建立 18 2.3.2 基于 Taq DNA 聚合酶的高 GC 模板扩增体系建立 23 2.3.3 对较长高 GC 片段扩增的初步探索 26 2.3.4 与商品化高 GC 扩增试剂的比较 30 2.4 本章小结 31 第三章 关于纳米金在再扩增 PCR 体系中作用机制的初探 32 3.1 引言 32 3.2 实验材料与方法 32 3.3 实验结果 32 3.4 本章小结 38 第四章 全文总结与展望 39 致谢 41 参考文献 43 攻读学位期间发表的学术论文 47 PAGE PAGE 10 第一章 绪论 PCR 技术介绍 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外对特定 DNA 模板进行扩增以得到一 定量特定 DNA 片段的技术。传统的 DNA 克隆方法需要将 DNA 序列装载在一个 载体上，然后通过活细胞的繁殖来实现对 DNA 的复制。这通常需要几天甚至是 几个星期。而利用 PCR 方法进行 DNA 扩增则只需要几个小时。此外，大多数生 化分析往往需要较多的 DNA，包括同位素检测，但是 PCR 反应至需要很少量的 DNA。因此 PCR 反应在对目标 DNA 分子实现较好扩增的同时也具有较高的灵 敏度。正是由于以上这些优点，PCR 已经得到了广泛的应用，除了在基础研究 中以外，在