高产CLA酿酒酵母的筛选 诱变及其亚油酸异构酶的分离纯化-微生物专业论文.docxVIP

检查发现其血靖、肠系膜淋巴结 、牌1脏细胞中的 一些免疫蛋白 如 IgA 、IgG 等显著 增加 ，并且在一定范围内与 CLA 加入剂量呈依赖式上升 。此外CLA 能促进牌脏淋 巴细胞的增殖及臼细胞介索 2 和l 抗体的合成 ，使?;;lJ物血清中 IgG 和 I快4 的浓度升高 1. 1. 2. 5 共辄亚油酸对骨髓的影响 Li(27)等人通过 小 鼠实验发现， CLA 能促进骨组织的分化与再 生 ，促进小鼠软骨 组织细胞的合成和矿物质在骨组织中的沉积 。在腔骨及大腿骨细胞培养时加入 CLA ，能明显降低前列腺素E2(PGE2) 的合成，正向调节膜岛索类生长因子来促进骨 髓的形1真(28)。在鸡饲料中添加一定的 CLA 可以防治小鸡的人 字腿和弓形腿等骨髓疾 病。 此外， CLA 还能够调节脂肪代谢，减少单不饱和脂肪酸的功能 1乱叫:改普 II型 糖尿病的代谢参数 ，降低血糖及改普血清中膜岛索水平 1132l ，能改普饲料的利用率 ， 进行营养再分配 作用， f吏脂肪含:w:下降，蛋白质和水分含id增高l吨臼l。 1.1.3 共辄亚油酸的合成 1. 1. 3. 1 化学合成法 (1)碱异构法 把含亚汕酸的原料溶解于乙 二醉 、两二醉、 DMSO 和 DMF 等有机溶剂中，在 M气保护、加热及强碱存在下，使亚油酸发生异构化 。这种方法操作简单，产物无 毒易处理， 在商业上应用较广 ，可大:I，.J:用于食品及药品添 加剂的 生产。原料可 以是 亚麻油、红花油、葵花籽汹或亚油酸等 ，在生产 中一般使用天然的植物油，很少使 用亚汕酸，因为其价格便宜。常采用 KOH 或 NaOH 作为f戚 ，在有机质中由于碱的 溶解度小而简要较多的有机洛剂，最常用的溶剂为乙 二醇I叫。 该方法的缺点是 :反应得到一系列具有位置和 l几何异构 CLA 的混合物，还存在 着环化等副反应。 (2)油酸烯丙醉脱71 油酸是十八碳原子的稀酸，能在其碳 10、11 原子之间形成共价双键 ，既可得到 cis-9，tranns-ll 的 CLA。油酸在光照条件下变为过轼化物，还原可以得到 8-或门-挂 基的油酸烯丙醉，其能够在 BF3 或 HCL 作用下转化为 CLA ，而f耐不能催化这个反 应I捕剧。 缺点是.该反应原料较贵，不适合 工业化生产 。 (3)过渡元素催化合成 CLA 过渡元素如钉 、姥 、组和1铭等司 以催化亚油酸异构 化反应。 Basu (31)等人研究发 现，将姥配合物洛余丙自雨和l甲醇的混合溶剂中，力n入红花油等富含亚油酸的油脂或 非共辄脂肪酸混合后 ，在保护气体氮气下加热反应 ，可使 90% 的非共辄双键转化为 共辄双键。 该反应缺的是 : 所需金属价格较贵 ，此外还需将 ? 合j戎相应的配合物，不够经 济。 1. 1. 3. 2 生物合成法 与化学合成法相 比，生物体能够利用自身的亚油酸异构酶转 化生成 CLA ，?生 成物异构体单一 ，操作步骤简单 ，越来越引起 人们 的注意，国内外众多学者致力于 产 CLA 的菌株研究工作。 1967 年 Kepl er(38)等人研究亚油酸代谢途径时发现 ，反色动物瘤胃中 的溶纤维丁 酸弧菌 ( Buty rivibrio fibri solvens) 能够将亚汹酸催 化生成 CLA ，生成的 CLA 并非 代谢途径终产物 ，还会边逝e 一步的还原生 成硬脂酸。 K剧im[39叼]辑等:人从奶牛牛.瘤胃 中分离得 到产 tran凶ss-斗1lω0，乒ρcα岱1ss-斗1l口2-CLA 的埃氏巨型球菌 (M egωa』川aerael.sdenii) 现老鼠肠迢中 也具有将 LA 转 化为 CLA 的能力。 1997 年 Yang[叫从小鼠的结肠中分 离鉴定了一株乳杆菌(L.reuteri PYR町，该菌能将亚汹酸转化为 cis9，t ans-CLA 0 同时 Kamlage(42) 等人也证实了人类肠道中的菌群也具有转 化合成 CLA 的能力。 由于瘤胃、肠道中的菌株对氧气较 为敏感 ，即使在实验室条件下 也很难培养 ， 不适合于工业 化生产，学者们开始寻找兼性厌氧 、培养条件易于控制 、无毒安全的 菌株进行 CLA 的转化合成。 199饨8盯.Tia jρ♀制d耐enrei比cμhl耐ω1i证iω1) 能将游离 的亚油酸转化成 CLA; Ra创lnlηio闷(制哺l对货氏丙酸杆菌转 化生成 CLA 的研究发现 ，在对数生长期 CLA 的形成量最多 ，有 80%-87% 的亚泄|酸都 被转 化，CLA 中 cis-9，trans- 11 异构体 的占85%-95% ，98% 以胞外的形式存在 ，而且发现 在接菌的同时加 入亚油酸比培养后再加 入亚油酸生成 的 CL