高产CLA酿酒酵母的筛选、诱变及其亚油酸异构酶的分离纯化-微生物专业论文.docxVIP

录 同口 1 引言. 1.1 共辄亚油酸简介1 1.1.1 共辄亚汹 酸的结构及其性质1 1.1.2 共辄亚泊酸的生理功能1 1.1.2. 1 共辄亚汹酸的抗癌 作用1 1.1.2. 2 共辄亚油酸 抗动脉粥应化作用2 1.1.2. 3 共辄亚油酸能降 低脂肪起到减肥 的作用2 1.1.2. 4 共辄亚泊酸的免疫 调节作用 . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. .2 1.1.2. 5 共辄亚油酸对骨髓的影 响3 1.1.3 共辄亚汹酸 的合成3 1.1.3. 1 化学合成法 .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . 3 1.1.3. 2 生物合成法 .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . 4 1.2 共辄亚油酸异构酶的研究进展5 1.2. 1 亚油酸异构酶的功 能5 1.2. 2 亚油酸异构酶的分离纯化. . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. .5 1.3 共辄亚油酸的检测方法6 1.3. 1 紫外 (UV) 检测法 6 1.3. 2 气相色谱法 (GC) 6 1.3. 3 气相一傅立叶变换红 外光谱联用法 (GC-FTIR) 6 1.3. 4 毛细管柱气相色谱法 6 1.3. 5 银离子高效液相 色谱法 (Ag-HPLC) 6 1.4 ;js:论文的研究思路 、内容和技术路线 7 1.4 . 1 研究思路.. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. .7 1.4. 2 研究 内容7 1.4 . 3 研究的技术路线. . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. .7 2 试验材料 与方法.. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. . . .. .8 2. 1 仪器与设备8 2.2 试验方法 10 2.2.1 酸奶 中产 CLA 菌株的筛选与鉴定 10 2. 2. 1.1 培养基 10 2.2. 1.2 CLA 紫外吸收标准曲线 的测定 10 2. 2. 1.3 厌轼环填 的制备 11 2.2. 1.4 酸奶中菌类的分离方法11 2 . 2 . 1.5 菌株的活化 11 2.2. 1.6 菌株产 CLA 的检测 11 2.2. 1.7 菌落的形态特征及菌体形态的鉴定. 11 2 . 2 . 1.8 通用引物的设计 11 2.2. 1.9 菌株 D阳的提取 11 2.2. 1.10 PCR 扩增、检测及纯化. 12 2.2. 1.11 感受态细胞的制备. 12 2.2. 1.四 目的片段的连接12 2.2. 1.13 目的片段的转化12 2.2. 1.14 阳性克隆子的鉴定. 13 2.2. 1.15 序列测定及同源性比对. 13 2.2.2 酵母菌中亚油酸异构酶的分离与纯化 13 2.2.2.1 蛋白质浓度的测定 13 2.2.2.2 酶活力的测定方法 13 2.2.2.3 菌种的活化 14 2.2.2.4 产酶诱导培养 14 2.2.2.5 菌体的收集. 14 2.2.2.6 细胞破碎 14 2.2.2.7 饱和碗酸锁分段盐析. 14 2.2.2.8 酶液的透析脱盐 .四 2.2.2.9 酶液的浓缩 15 2.2.2.10 Sephadex G- 100凝胶过滤层析 15 2.2.2.11 阴离子交换层析阴阳一纤维索 15 2.2.2.12 SDS电泳分析: 16 2.2.3 N注入选育高 产 CLA 酵母菌及培养条件的优化 16 2.2.3.1 菌株生长曲线的绘制与计数. 16 2.2.3.2 菌株培养与浓缩 17 2.2.3.3 菌膜的制作17 2.2.3.4 离子柬诱变 17 2.2.3.5