高产γ-氨基丁酸酿酒酵母的筛选及在梨酒酿造中的应用-生物工程专业论文.docxVIP

Classified Classified Index：0814．9 Secrecy Rate：Public—iz—e．．．—d— UDC：606 University Code：10082 Hebei University of Science and Technology Dissertation for the Master Degree S creening of Saccharomyces cerevis iae for High y-aminobutyric Acid Production and Its Using in Brewing of Pear Wine Candidate： Wang Wel Supervisor： Prof．Zhao Guoqun Enterprise Supervisor： RA．Guan Junfeng Academic Degree Appplied for： Master of Engineering Speciality： Biological Engineering Employer： School of Bioscience and Bioengineering Date of Oral Examination： May,2015 万方数据 河北科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工 河北科技大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方 式标明。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发 表或撰写过的作品或成果。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 厶 学位论文作者签名： 曼难 指导教师签名：遗 加fs年朔J弓日 山G年1。月，；日 河北科技大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权河北科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 口保密，在—-=年解密后适用本授权书。 本学位论文属于． ＼≠不保密。 (请在以上方框内打“寸’) 学位论文作者签名： 曼往 旨 导 狮师 躲名 I-序 加J占年钟月f弓日 幽∞ 怍鲜 惑朗 哆冀妒 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 Y．氨基丁酸(Y．Aminobutyric Acid，GABA)是一种非蛋白质的天然氨基酸，广 泛存在于植物、动物和微生物中。GABA具有抗衰老、降血压、改善肝功能、调节 激素分泌、改善睡眠、增强记忆力、防治肥胖等重要生理功能。GABA主要是通过 谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸脱羧转化而成的。乳酸菌、霉菌、酵母菌以及其他微生物 中均含有这种酶，因此，可通过提取谷氨酸脱羧酶或通过微生物发酵来生产GABA。 随着人们生活水平的提高和保健意识的增强，富含GABA的功能性食品已经成为研 究和开发的热点。梨果肉质细脆，含糖量高，香甜爽口，营养丰富，含有各种蛋白 质、矿物质和多种维生素等，是酿造果酒的良好原料。本课题旨在从水果表面筛选 出既能高产GABA，又仍有较强产酒精能力的酿酒酵母，并将它用于梨酒的酿制， 获得富含GABA的梨酒。 比色法检测发酵液中GABA含量的建立。当有乙醛酸、琥珀酸存在时，GABA与 溴甲酚绿发生专一的、特殊的显色反应。基于这一显色反应，建立了一种新的快速 测定GABA含量的比色法。显色剂中溴甲酚绿、琥珀酸和乙醛酸溶液的适宜浓度分别 为0．5、5．0和6．0 mg／mL。测定GABA含量的适宜条件为：4 mL样品溶液，加入2 mL 显色剂，混合摇匀，在25℃下水浴5 min，于617 nmN定吸光值。GABA标准曲线的 回归方程为A=0．1257C--0．0295，相关系数R2=0．9958。本检测方法的精密度(重复测 定样品的RSD)为0．88％，平均回收率为95．33％，说明本方法重现性和准确性较好。 该法操作简单，检测速度快，检测成本低。 高产GABA酿酒酵母的筛选。经过富集培养，使用GABA筛选培养基，从梨、葡 萄、苹果等水果表面分离、筛选出8株既能高产GABA，又有较强产酒精能力的酵母 菌株，其中菌株KS45产生GABA能力最强，达到了1．146 g／L，酒精度达到8．O％。经 微生物学及分子鉴定，菌株KS45为酿酒酵母。在YEPD培养基上30。C培养2 d，KS45 菌落形态为直径较大，表面光滑，呈乳白色，边缘整齐，易挑取；显微镜下的细胞 形态为卵圆形，有的为椭圆，个别有出