高产γ-氨基丁酸乳杆菌的筛选及诱变育种-生物化工专业论文.docxVIP

  河北工业大学硕士学位论文 高产 γ-氨基丁酸乳杆菌的筛选及诱变育种 i  PAGE 5 高产 γ-氨基丁酸乳杆菌的筛选及诱变育种 摘 要 乳杆菌是一类可以进行异型发酵的革兰氏阳性、厌氧的乳酸细菌。乳杆菌的生存 环境较为广泛，多存在于包括人类在内的哺乳动物的消化道内，菌种的数量以及种类 较丰富。乳杆菌的筛选主要来源于乳制品、传统的发酵产品以及发酵肉制品。 本课题分别从产地为威海、天津和哈尔滨 3 地的辣白菜汁中进行筛选，通过一系 列的生理生化鉴定实验，得到 6 株革兰氏阳性、接触酶阴性、不形成芽孢、不运动、 异型发酵、单个杆状或成对、成链排列的杆状菌株。初步对该 6 株菌株进行了定位， 定位结果为 TJ1 和 TJ2 为弯曲乳杆菌、HEB1 和 HEB2 为短乳杆菌、WH2 为植物乳杆 菌。用比色法测定 γ-氨基丁酸（GABA）的产量，对于 6 株菌株中 GABA 产量（3.8g/L） 最高的 WH1 菌株进行 16S rDNA 鉴定，结果显示该菌为沙克乳杆菌（Lactobacillus sakei），将该菌株的 16S rDNA 的碱基序列注册到 NCBI 数据库，其登录号为 JN717151， 还从未有沙克乳杆菌产 GABA 的报道。 本课题采用物理和化学的多种诱变育种手段对沙克乳杆菌进行选育，分别利用紫 外诱变、DES 诱变以及微波诱变对 WH1 菌株进行复合诱变处理，得到一株高产突变 株，GABA 的产量提高至 6.4g/L，较初始菌株提高了 68.4%。 本课题对诱变后高产菌株的发酵培养基的成分及含量进行了优化。以 GYP 培养基 为基础培养基，通过单因素实验对碳源、氮源、初始 pH、L-谷氨酸的浓度和碳氮比进 行了优化，选择出各组分的最佳浓度，提高 GABA 产量、降低发酵成本。优化后的发 酵培养基组分为：葡萄糖 20g、牛肉浸粉 10g、初始 pH6.0、1%的 L-谷氨酸、碳氮比 为 2:1，培养温度为 30℃，在该条件下，诱变后沙克乳杆菌的 GABA 产量有了进一步 的提高，产量可达 9.3g/L，较初始菌株提高了 145%。 本课题的意义在于从辣白菜汁中筛选出产 GABA 的乳杆菌并对其进行鉴定。实验 所用的方法，可为日后进一步从辣白菜汁中筛选出更多的产 GABA 的乳杆菌打下基础。 同时，由于首次报道可产 GABA 的沙克乳杆菌，研究该菌株产 GABA 的条件，可为日 后??一步利用该菌株奠定基础。 关键词：沙克乳杆菌，γ-氨基丁酸，筛选，诱变育种，优化培养基  iii  PAGE 7 RESEARCH ON SCREENING AND MUTATION OF HIGH-YIELD γ-AMINOBUTYRIC ACID PRODUCED BY LACTOBACILLUS ABSTRACT Lactobacillus is a kind of heteromorphosis lactic acid bacteria(LAB) which is Gram-positive facultatively anacrobic rod. Lactobacillus are widely exist in the living environment, a large number of them are exist in alimentary tract of the mammal including human being. The amout and the species of Lactobacillus is plentiful. The different species of Lactobacillus could be easily screened from various niches such as dairy products, traditional fermentation foods and fermented meat. In this study, Lactobacillus were screened from the kimchi juice of Weihai, Tianjin and Harbin. After series of physiological and biochemical tests, six strains were screened which are Gram-positive, catalase-negative, non-sporulating, motionless, facultatively anaerobic, rhabditiform single, in pair or short chain. The t